染料木黄酮对细胞光化学损伤的保护作用及其机制研究

摘要

目的:探讨染料木黄酮对补骨脂素光化学疗法(8-methoxypsoralenplus ultraviolet-A irradiation，PUVA)所致体外培养真皮成纤维细胞光化学损伤的保护作用，并研究其潜在的作用机制。
　　方法:采用酶消化法分离、培养原代真皮成纤维细胞，传代并扩增。以其特异性标记物波形蛋白(Vimentin)做免疫荧光鉴定。实验分三组:正常对照组、光化学损伤组及染料木黄酮组。运用PUVA联合构建体外培养真皮成纤维细胞光化学损伤模型。噻唑蓝比色法(MTT法)测定各组细胞增殖活性，确定染料木黄酮的最适光保护作用浓度，并绘制各组细胞连续10天的生长曲线。光镜下观察细胞形态，酶组织化学法检测细胞衰老β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-Gal)的表达。流式细胞术检测细胞周期及细胞内活性氧(Reactive oxygen species，ROS)含量，实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases，MMPs）及雌激素受体β(Estrogen receptor-β) mRNA的表达。
　　结果:酶消化法分离的真皮成纤维细胞经特异性标记物鉴定，阳性率达99％以上。在一定浓度范围内，染料木黄酮的光保护作用呈剂量依赖性增强。UVA照射细胞后24 h，光化学损伤组绝大多数细胞由分裂表型转化为无分裂活性表型(99.7±0.58)％，与正常对照组(7.7±1.15)％及染料木黄酮组(57.7±3.51)％均有显著性的差异(P＜0.01);根据描绘的生长曲线显示，正常对照组细胞呈现典型的“S”型曲线，光化学损伤组细胞呈一直线，几乎无增长，而染料木黄酮组细胞虽有增殖，但在观察期间未达到生长平台期;正常对照组、光化学损伤组及染料木黄酮组SA-β-Gal阳性细胞率分别为(0.67±0.58)％、(96.67±1.53)％、(51.67±2.08)％，各组间具有统计学差异(P＜0.01); PUVA能阻滞细胞于细胞周期的S期，染料木黄酮则在一定程度上解除该阻滞，使细胞由S期进入G2/M期;光化学损伤组细胞内MMPs mRNA表达及ROS含量均较正常对照组明显增高，染料木黄酮组则高于正常对照组而低于光化学损伤组，差异具有统计学意义(P＜0.05);染料木黄酮组细胞雌激素受体β(ER-β) mRNA表达较正常对照组及光化学损伤组明显增高(P＜0.01)。
　　结论:适当浓度的染料木黄酮能在一定程度上保护PUVA所致真皮成纤维细胞光化学损伤作用，表现在细胞增殖活性、形态学特征及SA-β-Gal表达等方面。其作用机制可能通过解除PUVA所致细胞周期阻滞，减少基质金属蛋白酶表达、降低细胞内活性氧产生及诱导ER-β上调等多种途径共同发挥其保护细胞光化学损伤作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 染料木黄酮对细胞光化学损伤的保护作用

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分 染料木黄酮保护细胞光化学损伤的作用机制

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

全文小结

参考文献

文献综述

致谢

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