中国首例产NDM-1阴沟肠杆菌感染病例研究

摘要

随着碳青霉烯类抗生素在临床上广泛使用，耐碳青霉烯类抗生素的致病菌逐渐增加。致病菌产碳青霉烯酶是碳青霉烯类耐药的主要机制。碳青霉烯酶是指能够明显水解亚胺培南或美罗培南等碳青霉烯类抗生素的一类β-内酰胺酶，包括Ambler分子结构分类的A、B、D三类酶，其中B类为金属酶MBLs，其催化活性依赖Zn2+，能灭活青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素，对氨曲南无水解活性，可被EDTA等金属螯合剂抑制。MBLs有IMP、VIM、SPM-1、GIM-1、SIM-1、AIM-1、DIM-1、TMB-1、KHM-1和NDM-1等基因型，主要分布于铜绿假单胞菌、不动杆菌属和肠杆菌科等临床常见病原菌中。耐药基因可通过质粒或整合子在不同细菌间水平扩散。首例产NDM-1的肺炎克雷伯菌(KP05-506)和大肠埃希菌(NF-NDM-1)于2008年报道后，这种耐药菌以惊人的速度向全球蔓延。欧洲、亚洲、南北美洲、拉丁美洲、澳大利亚相继报道了携带NDM-1基因的细菌。目前中国大陆已报道的产NDM-1的细菌有屎肠球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌，而产NDM-1的阴沟肠杆菌仅在印度地区发现，我国大陆地区未见报道。
　　 目的:对重庆医科大学附属第一医院2007年1月至2012年2月临床分离的阴沟肠杆菌进行碳青霉烯类敏感性筛查，发现1株产NDM-1的阴沟肠杆菌。为进一步了解该菌株感染的特点，本研究重点分析了该菌株的临床特点、耐药性和耐药机制。
　　 方法:常规分离菌株，采用纸片扩散法和琼脂稀释法进行不同抗菌药物敏感性试验，改良Hodge试验和Etest MBL确认纸条法表型筛查金属β-内酰胺酶，PCR扩增金属β-内酰胺酶基因型，接合试验分析质粒携带NDM-1基因的转移，PFGE鉴定产NDM-1金属酶的阴沟肠杆菌类型。Southern blotting进行blaNDM-1基因定位。
　　 结果:临床分离299株阴沟肠杆菌发现14株对碳青霉烯类抗生素耐药，其中6株产碳青霉烯酶，PCR证实1株分离自一名67岁女性肺炎患者痰液中的E.cloacae413携带有blaNDM-1基因。E.cloacae413体外药敏试验仅对多粘菌素B和磷霉素敏感，该菌株PFGE分型属B型。其携带的blaNDM-1基因位于大小约20 Kb的质粒上，该质粒上还同时携带有blaCTX-M-14，qnrA，qnrS, aac6' Ib-cr，rmtA多种耐药基因，这些耐药基因可随质粒在不同的细菌间转移，使得接合子E.coli J53(PNDM-1)同E.cloacae413一样对β-内酰胺酶类、喹诺酮类和氨基糖苷类抗菌药物耐药。
　　 结论:我院分离得到中国大陆地区首例产NDM-1的阴沟肠杆菌，该菌株对碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药均耐药，且这种耐药性可随质粒在细菌间传递，加强该菌株的监控和合理使用抗菌药物具有重要意义。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料

1．1 菌株来源

1．2 主要的试剂

1．3 主要实验仪器

2 实验方法

2．1 主要试剂的配置

2．2 药敏实验方法

2．3 产碳青霉烯酶表型筛查

2．4 PCR扩增金属β-内酰胺酶基因

2．5 接合试验测定质粒的转移和质粒PCR检测

2．6 PFGE分型

2．7 Soutern blotting

2．8 PCR检测质粒携带的耐药基因

3 结果

3．1 体外药敏检查结果

3．2 产碳青霉烯酶检测结果

3．3 PCR扩增金属β-内酰胺酶基因结果

3．4 产NDM-1阴沟肠杆菌E．cloacae 413临床资料

3．5 E．cloacae 413产金属β-内酰胺酶表型确认试验

3．6 接合试验和质粒PCR检测结果

3．7 PFGE分型和southern blotting结果

3．8 PCR检测E．Cloacae 413和E．coli J53(PNDM-1)质粒携带的耐药基因

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文