水解酶新显色底物的设计合成及初步表征

摘要

针对酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent-Assay，ELISA)分析效率低，可测范围窄等缺点。提出了利用等吸收波长同步测定多组分的新方法:单通道多组分酶联免疫吸附测定(Single-ChannelMultiple-Component Simultaneous ELISA，SCMCS-ELISA)。根据常用的免疫分析酶筛选出了牛小肠碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)、猪血清芳香酯酶、α-D-半乳糖苷酶和β-D-半乳糖苷酶做为候选水解酶。相应的选取常用的水解酶底物对硝基苯基乙酸酯、对硝基苯基磷酸酯二钠盐、对硝基苯基α-D-半乳糖苷做为候选组合底物。
　　根据候选水解酶和相应底物及产物对硝基苯酚(4-nitronaphthol，4-NNP)的吸收波长设计出了有望与之组合的水解酶新底物模型。合成之后测定新底物吸收峰的变化，对不符合吸收峰要求的底物在将母核上加以修饰官能团，最终得到了符合等吸收波长要求的底物4-硝基-l-萘磷酸酯和4-硝基-1-萘-β-D-半乳糖苷(4-nitro-1-naphthyl-β-D-galactopyranoside，4-NNPG)和其余有望进一步修饰并应用的新底物。经测定两个新底物的米氏常数(Michaelis-Mentenconstant，Km)、缓冲液效应、PH效应和动力学性质后，推断出其可以作为SCMCS-ELISA水解酶的新底物。

目录

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英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 水解酶新显色底物模型的建立

1 显色团B的选择

2 显色团A模型的选择

3 其余酶新显色底物的模型建立

本部分小结

第二部分 水解酶新显色底物的合成

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

本部分小结

第三部分 水解酶新显色底物活性的测定

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

本部分小结

总结与展望

参考文献

致谢

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