B7-H4在人乳腺癌的表达与肿瘤内浸润T细胞的相关性研究以及对外周血T细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:探讨共刺激分子B7-H4在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内浸润的T淋巴细胞和分泌细胞因子的相关性;体外实验观察重组人B7-H4蛋白对健康妇女和乳腺癌患者外周血活化T淋巴细胞增殖及凋亡的影响。
　　方法:应用S-P免疫组织化学染色检测B7-H4在16例乳腺良性病变组织、16例乳腺癌旁组织和79例乳腺癌组织的表达情况;间接免疫荧光双标染色分析72例乳腺癌组织内浸润的CD4+T、CD8+T细胞数量及TGF-β1和IFN-γ分泌情况，并分析64例浸润性乳腺癌组织中CD3+T和FOXP3+Treg细胞的浸润情况。体外分离15例健康妇女及15例乳腺癌患者外周血T淋巴细胞，分为空白对照组和B7-H4组，混合培养48h后采用流式细胞术检测各组T细胞增殖周期和/（或）凋亡率;ELISA芯片检测4组乳腺癌患者T细胞培养上清液中细胞因子的含量。
　　结果:
　　1、B7-H4在少部分乳腺癌旁组织、乳腺良性病变组织呈弱阳性表达，阳性率分别为25.00％(4/16)和37.50％(6/16);B7-H4在大多数浸润性乳腺癌组织呈阳性或强阳性表达，阳性率为75.00％(54/72)。B7-H4在乳腺癌组织的阳性率显著高于乳腺良性病变组织和癌旁组织(P=0.004，P=0.000)。
　　2、72例乳腺癌组织中，54例B7-H4阳性组织的CD4+T和CD8+T细胞浸润数量≤50个/3HP的病例占59.30％(32/54)和81.50％(44/54)，表达TGF-β1的CD4+T和IFN-γ的CD8+T细胞浸润数量≤50个/3HP的病例占61.10％(33/54)和83.30％(45/54); CD4+T、CD8+T细胞浸润数量＞50个/3HP的病例占40.70％(22/54)和18.50％(10/54)，表达TGF-β1的CD4+T和IFN-γ的CD8+T细胞浸润数量＞50个/3HP的病例占38.90％(21/54)和16.70％(9/54)。B7-H4阳性乳腺癌组织内浸润的CD8+T细胞及IFN-γ分泌细胞数量明显低于B7-H4阴性的乳腺癌组织(p=0.001，p=0.012);但B7-H4的表达与乳腺癌组织内浸润的CD4+T细胞及分泌TGF-β1的细胞数量无关(p=0.056，p=0.677)。
　　3、64例浸润性癌（除去8例粘液腺癌后）中，B7-H4的表达与乳腺癌间质浸润的FOXP3+Treg细胞数量正相关(r=0.368，p=0.003)，但与浸润的CD3+T细胞数量负相关（r=-0.316，p=0.011）。
　　4、与B7-H4混合培养48h后的健康妇女和乳腺癌患者外周血活化T细胞的S期细胞百分比均低于空白对照组。健康妇女B7-H4组和空白对照组S期细胞分别占（1.08±0.21）％和（1.69±0.95）％;乳腺癌患者B7-H4组和空白对照组S期细胞分别占(2.57±0.80)％和(6.08±1.37)％(P=0.010, P=0.036)。
　　5、外周血活化T细胞混合培养48h后的凋亡率分别是:健康妇女B7-H4组和空白对照组T细胞凋亡率为（19.13±5.26）％和(18.71±3.39)％，乳腺癌患者B7-H4组和空白对照组T细胞凋亡率为（25.14±1.76）％和（22.15±3.98）％;B7-H4组和空白对照组间T细胞凋亡率无显著差异(P=0.133，P=0.318)。乳腺癌患者B7-H4组CD8+T淋巴细胞凋亡率明显高于空白对照组，分别为21.3％和10.3％，且B7-H4组FOXP3+T细胞在CD4+T细胞中所占的比例明显高于空白对照组，分别为62.7％和1.1％。
　　6、乳腺癌患者外周血T细胞混合培养48h后，B7-H4组上清液中IL-17和TGF-β1的含量明显高于空白对照组，分别为555.17±108.42pg/ml和1122.40±221.79pg/ml;588.57±146.20 pg/ml和1194.17±165.21pg/ml(P=0.016, P=0.009)。
　　结论:B7-H4在乳腺癌中异常高表达且与肿瘤内FOXP3+Treg浸润数量正相关，并与CD8+T细胞浸润数量减少和分泌IFN-γ的CD8+T细胞减少有关。重组人B7-H4蛋白在体外抑制T细胞增殖并促进IL-17和TGF-β1分泌、也促进乳腺癌患者CD8+T细胞凋亡。B7-H4在削弱乳癌抗肿瘤细胞免疫中发挥作用，它可能成为乳腺癌潜在的免疫治疗靶点。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 B7-H4在人乳腺癌的表达与肿瘤内浸润淋巴细胞的相关性研究

1 材料

2 实验方法

3 统计学分析

4 结果

5 讨论

6 结论

第二部分 B7-H4对乳腺癌患者外周血T淋巴细胞增殖和凋亡的影响

1 材料

2 实验方法

3 统计学分析

4 结果

5 讨论

6 结论

全文总结

参考文献

附图

文献综述

致谢

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