氯霉素电化学适体传感器的构建及沙门氏菌invA基因比色新方法研究

摘要

近年来，食品的安全卫生管理已成为全社会共同关注的话题。其中，家畜的饲养过程中滥用抗生素的现象已引起特别关注，氯霉素的滥用现象亦普遍存在，残留与食物中的氯霉素会对人体带来严重的毒副作用。此外，食品中微生物的检测及控制亦是保证食品卫生安全的另一个重要方面，其中沙门氏菌作为食源性疾病中最重要的致病菌之一，应予以严格控制及管理。因此，能够对上述物质建立简便、快速、高灵敏的检测方法显得尤为重要。本课题分两部分进行研究:第一部分为氯霉素的电化学适体传感器的构建及检测氯霉素的新策略;第二部分为沙门氏菌invA基因的比色新方法研究。具体内容如下:
　　1.基于靶向诱导链释放的适体传感器检测蜂蜜中的氯霉素。
　　氯霉素是一种广谱抗生素，其抗菌效果显著并有良好的耐受性，已被广泛的应用与动物感染性疾病的治疗。然而，因其对人类产生严重的毒副作用，例如灰婴综合症、白血病或再生障碍性贫血等已被明令禁止在食用性动物中使用。本研究以氯霉素为靶物质，结合适体技术与电化学传感技术，基于靶向诱导链释放原理，构建电化学适体传感器对其进行高灵敏的检测。将氯霉素适体固定于电极上，然后与互补的生物素标记的检测探针杂交形成适体DNA杂化双链。当氯霉素存在时，靶向诱导链释放导致生物素标记的检测探针从电极上分离下来。然后链霉亲和素标记的碱性磷酸酶与电极上剩余的生物素标记的检测探针结合引起酶联信号放大，此信号随着氯霉素浓度的增加而减小。在最优的条件下，在1 nM-1000nM的浓度范围电化学信号与氯霉素的浓度对数成线性关系，检测限是0.29nM。此外，所建立起来的生物传感方法能够对蜂蜜中的氯霉素进行直接检测，其结果与传统的LC-MS/MS相符合。
　　2.基于DNAzyme修饰的金纳米粒子用于沙门氏菌DNA的比色法检测。
　　沙门氏菌属肠杆菌科，是革兰阴性肠道杆菌，它是食源性疾病中最重要的致病菌之一。它的致病性主要与侵袭蛋白密切相关，主要由一系列基因编码，其中invA基因为主要的毒力因子。本实验将invA基因作为靶序列来构建基于DNAzyme修饰的金纳米粒子比色法对其进行检测。首先将氨基修饰的捕获探针共价结合与修饰有NOS的96孔板上，与靶序列及金纳米双修饰信号探针和DNAzyme的生物纳米探针进行三明治杂交，DNAzyme与氯化高铁血红素结合后催化TMB和H2O2产生颜色变化，进而根据颜色变化对靶序列进行定量检测。在最优的条件下，在0.5nM-50nM的浓度范围吸光度值与靶序列的浓度对数成线性关系，检测限是0.44nM。该方法简便、灵敏，为未来实际沙门氏菌的检测提供了一个简单快速的策略，并将为临床诊断、食品安全和环境监测等领域中致病性微生物的检测提供了有力的工具。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

第一章 基于靶向诱导链释放的适体传感器检测蜂蜜中的氯霉素

1 引言

2．实验部分

3．结果与讨论

4．结论

参考文献

第二章 基于DNAzyme修饰的金纳米粒子用于沙门氏菌DNA的比色法检测

1 引言

2．实验部分

3．结果与讨论

4 小结

参考文献

文献综述 电化学传感器用于小分子检测的研究进展

致谢

攻读硕士期间撰写的文章目录