弹性蛋白平衡紊乱在高氧致新生鼠支气管肺发育不良中的作用研究

摘要

目的:观察正常新生小鼠和高氧暴露新生小鼠肺发育过程中弹性蛋白及其相关蛋白的表达情况，探讨弹性蛋白平衡紊乱在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)中的作用。
　　方法:新生24h内的C57BL/6小鼠随机分为两组:BPD组及对照组，BPD组应用高浓度氧暴露建立BPD模型，对照组在正常空气中成长，运用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、弹性纤维染色、次级脊计数、透射电镜、免疫组化及荧光定量PCR技术，观察正常小鼠肺发育及高氧暴露后1、3、7、14、21d肺组织病理生理改变及Tropoelastin和Fibulin-5蛋白，Tropoelastin、Fibrillin-1、Fibrillin-2、Fibulin-4、Fibulin-5、Lysyl oxidase、Neutrophil elastase、Integrinα V mRNA在正常小鼠和BPD小鼠中随时间变化的表达情况。
　　结果:对照组小鼠次级脊从第3d开始形成，随着日龄增加，弹性蛋白逐渐在其顶端规则有序的沉积，次级脊不断延伸，数量不断增加，在第14d达高峰，21d下降;与对照组相比，BPD小鼠第3天开始肺部次级脊形成受阻，第7d开始体重逐渐减轻，活动减少，直至21d可见肺泡融合导致正常肺泡结构消失，次级脊消失，肺泡数量明显减少，终末肺泡腔直径明显扩大及弹性蛋白明显增加且紊乱无序的沉积在肺泡间隔上;对照组Tropoelastin和弹性蛋白合成相关基因Fibrillin-1、Fibrillin-2、Fibulin-4、Fibulin-5、Integrinα v以及弹性蛋白降解酶Neutrophil elastase的mRNA，从出生1d时已有表达，均表现出先增加后减少的趋势;与对照组相比，BPD组Tropoelastin、Fibrillin-1、Fibrillin-2、Fibulin-4、Fibulin-5 mRNA的表达在3d、7d无明显差异，而在14d，21d表达增加，Lox mRNA在3d至21d较对照组明显增加，Neutrophil elastase mRNA在1d至14d表达较对照组增加，21d时减少至与对照组无明显差异。免疫组化显示对照组Tropoelastin和Fibulin-5主要沉积在次级脊、大气道和血管上，而BPD组则从7d开始紊乱无序的沉积在肺间质。
　　结论:弹性蛋白平衡是肺泡发育的重要机制，弹性蛋白平衡紊乱在BPD小鼠病理过程中起着重要作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 主要仪器和试剂

1．2 方法

2 结果

2．1 小鼠的—般状态及体重

2．2 肺组织病理HE染色观察

2．3 放射状肺泡计数(RAC)

2．4 肺组织弹性纤维染色及次级脊(Secondary Crest)观察

2．5 免疫组化检测Tropoelastin和Fibulin-5在肺组织表达

2．6 弹性纤维微观结构观察

2．7 各组肺组织中Tropoelastin、Fibrillin-1、Fibrillin-2、Fibulin-4、Fibulin-5、Lysyl oxidase、Neutrophil elastase、Integrin alpha V mRNA的动态变化

2．8 各组小鼠肺功能呼吸频率及潮气量比较

3 讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述 弹性纤维在肺发育和支气管肺发育不良中的作用

致谢

攻读硕士期间发表的论文