miR-125a-5p与miR-145对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及对p53表达的调控

摘要

目的：
　　microRNA(miRNA)是近年来在动植物种体内发现的一种内源性非编码RNA，可以通过与mRNA3'-UTR结合，发挥转录后调控作用，起到癌基因或抑癌基因的作用。研究表明，miRNA在大多数肿瘤中异常表达。在卵巢癌组织中，miR-125a表达水平升高，miR-145的表达水平降低，提示miRNA可能与卵巢癌的发生有关，但通过何种途径参与卵巢癌的发生未见报道。p53作为肿瘤中常见的抑癌基因，其编码p53蛋白是细胞周期中的负调节因子，故推测miR-125a-5p可能通过下调p53基因的表达来提高细胞的增殖与侵袭能力，miR-145可能通过上调p53基因的表达来降低细胞的增殖与侵袭能力。本研究通过建立过表达miR-125a-5p和miR-145的卵巢癌SKOV3细胞，研究miR-125a-5p、miR-145对细胞增殖、转移、侵袭及凋亡能力的影响，为进一步探讨miR-125a-5p和miR-145与卵巢癌相关作用的靶基因提供依据。
　　方法：
　　通过慢病毒转染技术将含miR-125a-5p和miR-145的质粒分别转入两组SKOV3细胞中，经嘌呤霉素筛选建立稳定过表达miR-125a-5p和miR-145的SKOV3细胞株。通过实时荧光定量PCR验证两种基因在细胞中的表达情况，MTT实验、流式细胞技术、transwell实验、划痕实验检测上调miR-125a-5p和miR-145后的SKOV3细胞在增殖、凋亡、侵袭及转移能力方面的改变，并用western-blot检测过表达miR-125a-5p和miR-145后SKOV3细胞中p53蛋白表达量的变化。
　　结果：
　　1.MTT实验表明，过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力较对照组有显著提高，过表达miR-145的SKOV3增殖能力显著降低(p＜0.05)。
　　2.流式细胞检测显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞处于S期的细胞比例增大，G0/G1期比例减少，细胞凋亡率降低;过表达miR-145的SKOV3细胞处于S期的细胞比例减小，G0/G1期比例减小，细胞凋亡率增高(p＜0.05)。
　　3.划痕实验表明过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞24h和48h迁移程度分别高出对照组2.37倍和4.28倍，过表达miR-125a-5p的实验组细胞迁移能力明显提高(P＜0.05)。
　　4.transwell实验结果显示，过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞侵袭能力明显提高;过表达miR-145的SKOV3细胞侵袭能力明显降低(P＜0.05)。
　　5.western-blot实验结果表明，过表达miR-125a-5p后的SKOV3细胞p53蛋白表达量降低;过表达miR-145的SKOV3细胞p53蛋白表达量升高(P＜0.05)。
　　结论：
　　miR-125a-5p过表达可促进SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力，而抑制细胞凋亡水平，其可能通过降低卵巢癌SKOV3细胞中抑癌基因p53的表达来增加细胞的肿瘤恶性。miR-145过表达可抑制SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力，促进细胞凋亡水平，其可能通过增加卵巢癌SKOV3细胞中抑癌基因p53的表达来降低细胞的肿瘤恶性。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

本课题研究的技术路线

第一部分：miR-125a-5p与miR-145对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分：miR-125a-5p与miR-145对卵巢癌SKOV3细胞p53表达的调控

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

文献综述 miRNA对恶性肿瘤增殖和侵袭的调控

致谢

硕士期间发表的学术论文