砷、锌对雄性大鼠生殖功能的联合作用

摘要

目的：
　　观察亚慢性饮水砷暴露对雄性大鼠睾丸组织的毒性作用，以及不同剂量的锌与砷联合，对大鼠生殖毒性的拮抗作用。探讨锌拮抗砷的生殖毒性可能的作用机制。
　　方法：
　　将40只4周龄的SPF（specific pathogen free）级雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠分成五组，每组8只，分别为:①对照组:双蒸水;②单纯染砷组:4 mg/kg NaAsO2;③砷加低锌组:4 mg/kg NaAsO2+8 mg/kg ZnSO4;④砷加中锌组:4 mg/kg NaAsO2+20 mg/kg ZnSO4;⑤砷加高锌组:4 mg/kg NaAsO2+50 mg/kg ZnSO4。连续灌胃染毒60天，取血和双侧睾丸，苏木精伊红染色(hematoxylin eosin，HE)观察睾丸组织形态学改变，放射免疫法测定血清中睾酮(testosterone，T)的含量，免疫组织化学法测定睾丸中Fas蛋白的表达，酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测睾丸组织丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)的活性，RT-PCR法检测睾丸中CuZn-SOD mRNA的表达，火焰原子吸收法测定睾丸组织中锌元素的含量。
　　结果：
　　与对照组相比单纯染砷组大鼠体重明显降低，三个加锌组与单纯染砷组相比体重正常，单纯染砷组睾丸组织重量也明显降低(P＜0.05)。中锌与高锌组与单纯染砷组比较，睾丸重量正常(P＜0.05)。与单纯染砷组比较，低锌组睾丸重量差异无统计学意义，睾丸脏器系数也无统计学意义(P＞0.05)。
　　HE染色结果显示:单纯染砷组各级的生精细胞都减少且排列疏松，管腔中只有少量精子;低锌组生精细胞和成熟精子数量均较少，管腔内出现脱落细胞;中锌组和高锌组各级生精细胞都有增加，管腔中成熟精子增多，形态结构正常。
　　免疫组化结果:单纯染砷组睾丸组织中的Fas蛋白表达量显著高于对照组，三个加锌组Fas蛋白的表达都明显降低。砷加低锌组和高锌组Fas蛋白表达高于对照组(P＜0.05)。砷加中锌组Fas蛋白表达与对照组无统计学差异(P＞0.05)。
　　放射免疫测定结果:与对照组比较，单纯染砷组的血清睾酮含量显著下降，低锌、中锌及高锌组与单纯染砷组比较都显著上升(P＜0.05)，而高锌组的睾酮含量与中锌组比较，反而出现下降。
　　火焰原子吸收法结果:和对照组相比，单纯染砷组大鼠睾丸锌含量明显降低，低锌组也明显比对照组低，高锌组则明显比对照组高(P＜0.05)。中锌组睾丸锌含量与对照组比差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　PCR结果:与对照组相比，单纯染砷组CuZn-SOD mRNA表达量降低，高锌组表达升高(P＜0.05)，低锌和中锌组与对照组相比无统计学意义(P＞0.05);中、高锌组与单纯染砷组比较CuZn-SOD mRNA表达均升高(P＜0.05)。
　　ELISA结果:与对照组相比，单纯染砷组和砷加低、高锌组的MDA含量都明显的上调，而中锌组却明显的下调;中、高锌组睾丸MDA都明显低于单纯染砷组(P＜0.05)。与对照组比较，单纯染砷组和砷加低、高锌组的睾丸组织的LDH和SOD活力都有明显的下降，中锌组的SOD比对照组则明显上升(P＜0.05)，而中锌组LDH与对照组比差异无统计学意义(P＞0.05);与单纯染砷组比较，中锌组和高锌组的LDH和SOD活性明显上升(P＜0.05)。
　　结论：
　　饮水砷暴露可以引起雄性大鼠睾丸组织病理学改变，睾酮分泌减少，睾丸锌含量下降，Fas蛋白表达增多，出现脂质过氧化损伤，影响CuZn-SOD mRNA的表达，对大鼠的睾丸组织和生殖功能造成损害。适当剂量的锌可以拮抗这种毒性损伤作用，为砷中毒的防治提供实验依据。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 统计学分析

2 结果

2．1 生长发育状况

2．2 睾丸组织病理学变化

2．3 睾丸组织中Fas蛋白的表达

2．4 血清锌含量

2．5 血清睾酮含量

2．6 脂质过氧化相关指标

2．7 睾丸组织CuZn-SODmRNA表达水平

3 讨论

3．1 砷对大鼠睾丸的影响及补锌后的变化

3．2 睾丸组织的病理性变化

3．3 性激素水平变化

3．4 脂质过氧化相关酶的变化

3．5 睾丸Fas蛋白的变化

4 结论

参考文献

附图

文献综述 砷的生殖毒性研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况