人Nanog基因shRNA慢病毒载体构建及其转染人胃癌裸鼠移植瘤的实验研究

摘要

目的:构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体，探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达，检测其对裸鼠移植瘤生长的影响。
　　方法:将前期已设计完成的Nanog基因特异性的siRNA构建于慢病毒载体中，制备携带shRNA-Nanog的慢病毒，同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型，以Lentivirus-shRNA-Nanog转染的裸鼠作为实验组（目的组），以无关序列慢病毒转染的裸鼠（空载体组）及未转染的裸鼠（未转染组）作为对照组，测量肿瘤瘤体体积及质量的变化，活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况，Western blot检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况，TUNEL法观察皮下移植瘤中胃癌细胞SGC-7901凋亡情况。
　　结果:活体荧光成像显示转染27天后，运用活体荧光成像观察，目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未转染组，裸鼠移植瘤瘤体积及瘤重小于未转染组及空载体组;Western blot显示目的组Nanog蛋白表达明显降低;TUNEL实验显示目的组凋亡系数明显增大，而空载体组与未转染组差异比较无统计学意义。
　　结论:重组慢病毒lentivirus-shRNA-Nanog转染鼠后，成功下调Nanog蛋白表达水平，诱导胃癌细胞凋亡，明显抑制肿瘤生长，为胃癌的基因治疗奠定基础。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 统计学分析

2 实验结果

2．1 Lentivirus-shRNA-Nanog转染效果的检测

2．2 动物模型的建立及分组

2．3 肿瘤体积与质量分析

2．4 GFP标记的胃癌裸鼠活体荧光强度分析及肿瘤转移情况

2．5 Western blot检测目的Nanog蛋白的表达

2．6 TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 Nanog基因的生物功能研究

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文