SLC22A3基因intron7对基因转录的负性调节作用研究

摘要

目的:研究人SLC22A3基因intron7及其SNP位点rs2048327(A/G)对基因转录的调节作用。
　　方法:以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体(BAC)为模板，PCR扩增人SLC22A3 intron7，克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic和pGL3-Promoter，得到野生型重组质pGL3-Basic-SLCi7wt和pGL3-Promoter-SLCi7wt;以pGL3-Promoter-SLCi7wt为模板，行PCR定点诱变，构建突变型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7mut。重组质粒与内参质粒pRL-SV40共转染人胚肾细胞HEK293T，24 h后检测荧光素酶活性。利用统计软件SPSS17.0分析各组荧光素酶活性之间的差异。
　　结果:成功构建了包含野生型和突变型人SLC22A3 intron7的重组质粒 pGL3-Basic-SLCi7wt、 pGL3-Promoter-SLCi7wt以及pGL3-Promoter-SLCi7mut。野生型重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt荧光素酶活性与pGL3-Basic无显著差异(P=0.986);野生型重组质粒pGL3-promoter-SLCi7wt荧光素酶活性相较于pGL3-Promoter显著降低（（3.514±0.09609）vs（6.286±0.3699），P=0.000）;突变型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7mut荧光素酶活性（2.089±0.3315）相对于pGL3-Promoter显著下调(P=0.000)，较pGL3-Promoter-SLCi7wt亦有所下降(P=0.000)。
　　结论:人类SLC22A3基因intron7对基因转录具有负性调节活性，能显著降低荧光素酶报告基因的表达水平;定位于该内含子序列上的SNP rs2048327位点A→G的改变，可能增强该内含子所具有的负性调节作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 统计学分析

2 结果

2．1 野生型hSLC22A3 intron7重组质粒的构建

2．2 突变型hSLC22A3 intron7重组质粒的构建

2．3 荧光素酶活性检测

3 讨论

结论

参考文献

文献综述 有机阳离子转运蛋白3(OCT3／SLC22A3)研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文