JNK和Akt细胞内信号通路调控TNF-α诱导人肺成纤维细胞表达IL-32：肺脏炎症反应的一种潜在机制

摘要

目的：
　　呼吸道疾病包括呼吸道感染、支气管哮喘、肺结核、肺纤维化和慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种全球性疾病，世界上有数百万人深受这类疾病的困扰。COPD导致的死亡预计到2020年将排世界第三位；全世界300百万人患有支气管哮喘，其导致的死亡人数每年达18万。人肺成纤维细胞（Human pulmonary fibroblasts,HPF）不仅是肺的结构细胞，而且在肺固有免疫中扮演着重要角色。IL-32作为气道炎症中一个重要的炎症因子，促进肺部炎症发展，在肺部感染中有抵御感染的作用，在肺成纤维细胞当中的免疫学作用尚未有报道。TNF-α是气道炎症发展过程中一个关键的调节因子。研究气道炎症疾病中TNF-α调节人肺成纤维细胞表达IL-32的机制，有助于我们了解气道炎症的发展过程。
　　方法：
　　Q-PCR检测炎症刺激因子处理的人肺成纤维细胞中 IL-32因子的mRNA表达变化；TNF-α单独或与其它因子联合处理的人肺成纤维细胞24小时后，采用ELISA检测上清中IL-32蛋白水平的变化；Western blot检测TNF-α处理的人肺成纤维细胞内信号通路蛋白JNK和Akt的磷酸化水平；采用信号通路抑制剂联合TNF-α处理的人肺成纤维细胞24小时后，采用ELISA检测上清中IL-32蛋白水平的变化。
　　结果：
　　TNF-α诱导可人肺成纤维细胞表达IL-32因子的四种mRNA剪接体（α、β、γ和δ）的表达增高，且具有一定的剂量依赖性。TNF-α诱导上调的IL-32蛋白主要是活性最强的IL-32γ蛋白，IL-32α蛋白并无诱导表达。与IL-17C、LPS、IFN-γ、Poly I:C、HMGB-1、Leptin和IL-27联合诱导HPF后，其IL-32γ蛋白水平较TNF-α单独刺激组无显著差异，提示这些因子与TNF-α无协同作用。TNF-α激活人肺成纤维细胞后，在10分钟、20分钟时JNK和Akt的磷酸化显著增高。JNK抑制剂和Akt抑制剂联合TNF-α处理HPF组较单独TNF-α处理组的JNK和Akt的磷酸化显著降低，诱导的IL-32水平也显著下调。
　　结论：
　　TNF-α通过激活人肺成纤维细胞JNK和Akt信号通路诱导表达IL-32。

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封面

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1实验材料

1.1材料

1.2主要仪器

2实验方法

2.1细胞培养

2.2肺成纤维细胞总RNA提取

2.3 Q-PCR实验

2.4 ELISA实验

2.5 Western Blot 分析

3实验结果

3.1肺成纤维细胞中IL-32mRNA 水平表达上调

3.2 TNF-α诱导肺成纤维细胞IL-32蛋白水平表达上调

3.3 TNF-α诱导人肺成纤维细胞表达IL-32信号通路的筛选

3.4 TNF-α激活肺成纤维细胞的PI3K-Akt和JNK信号通路

4讨论

全文总结

参考文献

文献综述: IL-32生物活性之新见解

致谢

攻读硕士学位期间发表论文及参加学术活动情况