KRAS在早孕小鼠子宫内膜中的表达及其对胚胎着床过程的调控作用

摘要

目的：
　　成功的胚胎着床依赖于有活性的胚泡及可接受性的子宫之间的相互作用，在这一过程中母体子宫内膜发生着一系列的生理变化以达到其可容性状态。KRAS作为一个癌基因参与细胞的各种生理变化，包括增殖，分化，凋亡，存活等等。为了探讨 KRAS在小鼠胚胎着床中的调控作用，利用荧光定量PCR，免疫组化及Western blot研究KRAS基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律，通过体内及体外人工诱导蜕膜化实验，研究KRAS对子宫内膜的蜕膜化过程的调控作用，并通过体外沉默KRAS基因表达，探讨其对小鼠子宫内膜基质细胞的增殖调控作用，最后进一步通过体内功能实验进一步证实KRAS对小鼠胚胎的着床调控作用，为进一步探讨小鼠的胚胎着床机制打下基础。
　　方法：
　　（1）应用实时荧光定量PCR, Western blot及免疫组化研究KRAS基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律。
　　（2）通过体内及体外人工诱导蜕膜化，探讨KRAS对子宫内膜的蜕膜化的调控作用。
　　（3）ELISA检测下调KRAS蛋白表达，体外诱导蜕膜化后基质细胞PRL的分泌水平。
　　（4）应用流式细胞术进行转染KRAS siRNA后基质细胞的周期分析。
　　（5）宫角注射KRAS siRNA，通过尾静脉注射台盼蓝标记着床点，分析胚胎着床情况。
　　结果：
　　（1）KRAS mRNA及蛋白表达总量在早孕及假孕的小鼠子宫内膜中无明显差异。
　　（2）免疫组化结果显示KRAS蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达位置发生改变，在妊娠D1, D4，D5，D6天主要表达在腔上皮及腺上皮，并逐渐增强，而在着床点KRAS主要表达在子宫内膜初级蜕膜区，并随着初级蜕膜区扩大，向外扩展。
　　（3）KRAS调控小鼠子宫内膜的蜕膜化过程及影响基质细胞的周期。
　　（4）KRAS蛋白表达影响小鼠胚胎着床率。
　　结论：
　　KRAS通过在早孕小鼠子宫内膜中表达位置的空间改变，调控小鼠子宫内膜的蜕膜化过程及对基质细胞的周期调控，从而调控小鼠胚胎着床过程。

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封面

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英汉缩略语名词对照

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英文摘要

前言

1材料

1.1实验动物及材料收集

1.2主要仪器与耗材

1.3主要试剂

2方法

2.1实时荧光定量PCR（qPCR）

2.2免疫印迹（WB）

2.3免疫组织化学

2.4体内人工诱导蜕膜化

2.5基质细胞分离培养及体外诱导蜕膜化

2.6 ELISA

2.7转染实验

2.8宫角注射实验

2.9统计学分析

3结果

3.1 KRAS在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律

3.2 KRAS在蜕膜化的小鼠子宫内膜基质细胞中的表达

3.3 KRAS表达下调抑制基质细胞的增殖

3.4 KRAS参与小鼠基质细胞蜕膜化过程

3.5 KRAS对小鼠胚胎着床过程的影响

4讨论

全文总结

参考文献

文献综述: KRAS癌基因的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文