氯胺酮干扰非洲爪蟾早期胚胎分子机制的研究

摘要

目的：
　　氯胺酮俗称K粉，是非特异性N-甲基-天门冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂，临床常用于手术麻醉，是国际上流行的一类新型毒品。关于氯胺酮滥用对早期胚胎发育的影响开展了大量的研究。目前认为氯胺酮的主要药理作用是通过对NMDA受体的拮抗实现的，NMDA受体是一类对Ca2+高度通透的配体门控离子通道，在神经系统的发育、神经元存活和突触可塑性上发挥着重要的作用。然而对于氯胺酮滥用影响早期胚胎发育所引起的出生缺陷目前尚缺乏有效的干预手段，很大部分原因是因为我们目前还不完全了解氯胺酮对早期胚胎发育的影响以及其作用的分子机制。因此研究氯胺酮暴露对胚胎早期发育影响的分子机制对于我们了解该类药物的药理毒性作用、评估该类药物在手术麻醉中的潜在风险、预防和干预该类药物滥用导致的出生缺陷具有很强的现实意义和科学价值。
　　材料和方法：
　　胚胎原位杂交，胚胎显微注射，RT-PCR,双重荧光素酶报告分析，分子克隆技术构建质粒，细胞培养与转染，电泳迁移率分析
　　结果：
　　1.氯胺酮暴露导致胚胎发生色素细胞减少或消失、肠道粗大、无神经，眼睛发育异常、颅面软骨缩小或消失等一系列的发育缺陷；
　　2.氯胺酮可以抑制Zic5在神经嵴区域的表达；
　　3.氯胺酮使得Notch信号通路下游靶基因的表达量下降；
　　4. Notch信号通路的核内部分NICD能够明显增强爪蛙zic5基因的表达；
　　5.成功构建爪蛙Zic5基因启动子驱动重组荧光素酶报告基因质粒共10个，并通过双重荧光素酶报告分析显示NICD对爪蛙Zic5基因-186/-29启动子转录活性的增强作用明显低于-200/-29启动子转录活性，初步估计NICD结合Zic5基因启动子的区域在-186到-200；
　　6.电泳迁移率分析发现爪蛙 Zic5-200/-186探针能与转染了NICD的SY5Y细胞总蛋白结合。
　　结论：
　　1.氯胺酮通过干扰胚胎神经嵴发育引起一系列的发育缺陷
　　2.Zic5是氯胺酮干扰早期胚胎神经嵴诱导的分子靶点
　　3.NICD能上调Zic5基因的表达，显著增强爪蛙zic5启动子活性并且其识别位点为启动子-200/-186
　　4.Notch信号通路在氯胺酮干扰神经嵴诱导中发挥这关键作用

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英汉缩略语名词对照

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英文摘要

前言

1、材料和方法

1.1主要材料及仪器

1.2实验方法

2、结果

2.1 氯胺酮干扰了神经嵴细胞的发育

2.2 Zic5是氯胺酮干扰早期神经嵴诱导的分子靶点

2.3 Notch信号通路参与氯胺酮干扰早期神经嵴的诱导

2.4 Notch信号通路对Zic5基因启动子活性的影响

2.5 EMSA实验验证NICD与ZIC5基因启动子结合

3、讨论

参考文献

文献综述: Notch信号通路在脑肿瘤发生中的作用

致谢

攻读硕士研究生期间发表的学术论文