TRAMP-C2冻融抗原联合PEP-3多肽致敏树突状细胞诱导CTL对TRAMP-C2作用的研究

摘要

目的：研究TRAMP-C2肿瘤冻融抗原联合PEP-3多肽致敏树突状细胞(DCs)体外诱导前列腺癌特异性细胞毒性T淋巴细胞( CTL)对前列腺癌细胞TRAMP-C2的杀伤效应。
　　方法：联合应用rhGM-CSF和rhIL-4体外培养诱导骨髓来源单核细胞获得树突状细胞，负载TRAMP-C2肿瘤细胞冻融抗原和/或PEP-3多肽后发育为成熟树突状细胞，流式细胞术检测其细胞表型的变化。与同种异体脾T淋巴细胞共同孵育24h后刺激成为CTLs，将其与TRAMP-C2细胞共培养，通过流式细胞术、CCK8实验、软琼脂克隆实验、Transwell小室迁移实验以及划痕实验检测其对前列腺癌细胞TRAMP-C2的杀伤效应。ELISA法检测DCs和CTL上清液中IFN-γ, TNF-β,以及IL-12含量。
　　结果：与未致敏树突状细胞相比，致敏树突状细胞高表达与其成熟相关的MHC-II分子、细胞粘附分子和共刺激分子(CD11c，CD40，CD80，CD86)。冻融抗原联合PEP-3多肽致敏DCs诱导的CTL对TRAMP-C2细胞凋亡、侵袭和迁移能力的影响明显高于其他组，细胞凋亡率明显增加，侵袭和迁移能力明显减弱。冻融抗原联合PEP-3致敏的DCs与T淋巴细胞共培养后，IFN-γ、TNF-β和 IL-12的分泌量显著高于其它组。
　　结论：TRAMP-C2肿瘤细胞冻融抗原联合PEP-3多肽致敏的树突状细胞体外诱导产生的CTL对TRAMP-C2细胞具有明显杀伤效应。

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前言

第一部分 树突状细胞疫苗的制备

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2实验细胞

1.3主要试剂

1.4 主要仪器与设备

1.5 主要试剂的配制与制备

2 实验方法

2.1 体外扩增小鼠未成熟树突状细胞

2.2 流式细胞术鉴定未成熟树突状细胞

2.3树突状细胞疫苗制备

2.4流式细胞术鉴定成熟树突状细胞

3 实验结果

3.1 体外扩增小鼠未成熟树突状细胞

3.2 小鼠未成熟树突状细胞鉴定

3.3 树突状细胞疫苗制备

4 讨 论

第二部分 树突状细胞疫苗诱导CTLs杀伤TRAMP-C2细胞

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2实验细胞TRAMP-C2

1.3 主要试剂

1.4 主要溶液与试剂的配制

1.5 主要仪器与设备

2 实验方法

2.1 TRAMP-C2细胞的培养与冻存

2.2负载TRAMP-C2冻融抗原和/或PEP-3多肽的DCs疫苗制备

2.3 C57BL/6小鼠淋巴细胞的提取

2.4 DCs疫苗诱导产生CTLs

2.5 DCs疫苗诱导产生CTLs对TRAMP-C2细胞增殖和凋亡的影响

2.6 CCK-8法检测DCs疫苗诱导的CTLs对TRAMP-C2细胞杀伤作用

2.7 DCs疫苗诱导CTLs对TRAMP-C2细胞迁移能力影响的检测

2.8 细胞因子IFN-γ, TNF-β 和 IL-12的ELISA试剂盒检测

2.9 统计学处理

3 实验结果

3.1 DCs疫苗诱导的CTLs抑制TRAMP-C2增殖并促进细胞凋亡

3.2 DCs疫苗诱导产生的CTLs抑制TRAMP-C2细胞迁移能力

3.3 ELISA检测细胞因子浓度

4 讨 论

全文总结

参考文献

文献综述:树突状细胞疫苗与前列腺癌免疫治疗新进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文