水通道蛋白9对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和侵袭迁移的影响

摘要

目的：研究水通道蛋白9（ Aquaporin9,AQP9）对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和侵袭迁移的影响。
　　方法：构建靶向AQP9基因的慢病毒过表达载体，利用293T包装细胞获得重组慢病毒并转染HepG2细胞并用嘌呤霉素筛选出稳定细胞株，激光共聚焦验证转染效率，qRT-PCR及Western blot检测AQP9表达情况。实验分组：CC组为无慢病毒转染的HepG2细胞、PWPI组为空载体慢病毒转染的HepG2细胞，过表达AQP9组为含过表达AQP9基因慢病毒载体转染的HepG2细胞。利用平板克隆、划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验以及流式细胞仪分别检测 AQP9对 HepG2增殖、迁移、侵袭、凋亡以及周期的影响。多组间数据比较采用单因素方差分析，两组间数据比较采用独立样本t检验。
　　结果：激光共聚焦显示，HepG2细胞膜在转染AQP9后高表达绿色荧光蛋白，qRT-PCR及WB检测AQP9的mRNA和蛋白质表达较其他两组均明显上升,差异均有统计学意义（p均<0.01)。平板克隆结果显示， CC组、PWPI组和过表达 AQP9组克隆形成率分别为（23.53±2.10）％、（23.00±2.02）%、（16.93±3.19）%，组间差异有统计学意义（F=6.46，P=0.032<0.05）。流式测凋亡结果显示，CC组、PWPI组和过表达AQP9组总凋亡率分别为：（19.70±2.49）%、（24.37±2.38）%、（44.96±3.53）%，组间差异有统计学意义（F=66.88，P<0.01），与PWPI组和CC组比较，差异均有统计学意义（p均<0.01）；流式测周期结果显示，CC组、PWPI组和过表达AQP9组细胞停留在S期和G1期的细胞百分比分别为（34.39±4.33）%和（54.58±0.89）%；（35.65±1.39）%和（53.08±2.06）%；（15.25±1.81）%和（66.58±0.99）%，组间差异均有统计学意义（F值分别为49.25和82.09，P均<0.01）。划痕愈合实验结果显示，过表达 AQP9组细胞24h的迁移率为（6.38±1.70）%，与PWPI组（16.74±1.40）%比较，差异有统计学意义(P=0.01<0.05)。Transwell实验结果显示，过表达AQP9组24h穿过细胞数为（17±8）个，与PWPI组（95±11）个和CC组（109±9）个比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。
　　结论：AQP9能够抑制HepG2细胞迁移和侵袭能力，诱导细胞发生凋亡并通过产生G1/S期阻滞抑制细胞增殖。

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1材料和方法

2结果

3 讨论

全文总结

参考文献

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文献综述: AQP9在肝脏疾病中的研究现状

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