DHA对果糖诱导的肝细胞脂质蓄积的影响及机制研究

摘要

目的：果糖摄入增多可引起肝脏内脂质蓄积，进而导致肝脏发生脂肪变性。有研究发现ω-3多不饱和脂肪酸(如DHA)对肝脏的脂肪变性有一定的保护作用。本研究拟以原代肝脏细胞体外培养为研究体系，探讨DHA是否能够改善果糖诱导的肝脏脂质蓄积及可能的分子机制。
　　方法：选用正常雄性的C57 BL/6J小鼠，采用肝脏肝门静脉灌流的方法，获得肝脏细胞；得到的肝脏细胞分别用果糖、果糖和DHA、DHA、PBA和果糖、TM处理细胞24小时以后进行油红O染色观察细胞内红染脂滴蓄积的情况；Real-time PCR检测肝细胞内目标基因表达水平；Western blotting检测肝细胞内 ACC、SREBP、ACOX1、GRP78/BIP、IRE、p-IRE蛋白表达水平。
　　结果：油红O染色结果表明原代肝细胞在果糖和衣霉素作用下发生明显的脂质蓄积，在DHA的作用下细胞内脂质蓄积明显减少，而果糖和DHA复合处理组细胞内脂质蓄积也明显减轻，同时PBA预处理后再加入果糖干预肝细胞脂质蓄积明显减轻；Real-time PCR结果显示原代肝细胞在果糖和衣霉素作用下FAS、ACC、SREBP、GRP78的mRNA表达水平较对照组明显上调；DHA处理组FAS、ACC、SREBP、GRP78的mRNA表达水平较对照组无明显变化，CPT1α、ACOX1明显上调；果糖和DHA复合处理组FAS、ACC、GRP78的mRNA表达水平较果糖组明显下调，CPT1α、ACOX1明显上调；果糖和PBA复合处理组FAS、ACC、SREBP、GRP78的mRNA表达水平较果糖组明显下调，CPT1α、ACOX1无明显变化。Western blotting结果提示原代肝细胞在果糖和衣霉素作用下ACC、SREBP、GRP78/BIP、IRE和p-IRE蛋白表达较对照组显著增强；DHA处理组ACC、SREBP、GRP78/BIP、IRE和p-IRE蛋白表达较对照组无明显变化，ACOX1蛋白表达明显增强；果糖和DHA复合处理组与果糖和PBA复合处理组ACC、SREBP、GRP78/BIP、IRE和p-IRE蛋白表达较果糖组蛋白表达明显减弱， ACOX1蛋白表达明显增强。
　　结论：果糖可通过诱导内质网应激激活脂质代谢相关基因的表达进而导致肝脏脂肪变性，DHA通过抑制内质网应激相关基因的表达进而缓解果糖诱导的肝脏脂肪变性。饮食中添加少量的DHA可以预防果糖摄入过多引发的非酒精行脂肪肝的发生，从而减少疾病的发生。