人子宫颈癌表达CCL1与CCR8+FOXP3+Treg细胞浸润及临床病理特征的相关性研究

摘要

目的：
　　检测趋化因子 CCL1在人子宫颈癌细胞的表达并分析其与肿瘤微环境内CCR8+FOXP3+Treg细胞数量的相关性，探讨CCL1-CCR8促进Treg细胞浸润的意义；统计学分析宫颈癌 CCL1的表达与临床病理特征的相关性。定量PCR检测CCL1基因在不同HPV亚型人宫颈癌细胞株的表达水平。
　　方法：
　　采用免疫组化染色检测 CCL1在人正常宫颈组织、高级别鳞状上皮内病变及宫颈癌组织中的表达。应用免疫荧光双标法检测宫颈癌组织中FOXP3+Treg细胞的趋化因子受体CCR8表达，统计学分析癌细胞表达CCL1与宫颈癌间质浸润的CCR8+FOXP3+Treg数量的相关性。并分析趋化因子 CCL1表达与子宫颈癌的浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度、病理组织分型及患者年龄等临床病理因素的相关性；体外培养HPV阳性和阴性的宫颈癌细胞株Hela、SiHa和C33A细胞，荧光定量PCR检测各细胞株CCL1基因表达水平。
　　结果：
　　正常人宫颈上皮不表达CCL1，高级别鳞状上皮内病变的部分上皮微弱表达CCL1，阳性率为10％（2/20）；子宫颈癌CCL1的阳性表达率为45%（27/60），显著高于正常宫颈上皮和高级别鳞状上皮内病变的细胞（p<0.01，p<0.01）；免疫荧光显示FOXP3+Treg细胞表达CCR8，宫颈癌CCL1阳性病例癌间质内浸润的CCR8+FOXP3+T细胞的数量显著高于CCL1阴性病例；且CCL1的表达与肿瘤内浸润的FOXP3+T细胞数量呈正相关（p<0.01）。统计学相关分析结果表明宫颈癌细胞表达CCL1与肿瘤的淋巴结转移相关（p<0.05）,与肿瘤浸润深度、瘤细胞分化程度、病理分型及患者年龄无关。荧光定量 PCR检测结果显示HPV-16阳性（SiHa细胞）和HPV阴性宫颈癌细胞（C33A）的CCL1基因表达水平显著高于 HPV-18阳性的宫颈癌细胞（Hela）（p<0.01， p<0.05）。
　　结论:
　　1.趋化因子 CCL1在宫颈癌细胞的表达明显高于正常宫颈和高级别鳞状上皮内病变组织。
　　2.子宫颈癌细胞表达CCL1与肿瘤内浸润的CCR8+FOXP3+Treg细胞数量增多有关，提示CCL1-CCR8轴在促进Treg浸润、抑制抗肿瘤免疫中发挥作用。
　　3.子宫颈癌细胞表达CCL1与肿瘤的淋巴结转移相关。
　　4.三个宫颈癌细胞株中CCL1基因表达水平为SiHa细胞> C33A细胞>Hela细胞， HPV-16阳性细胞株可作为筛选出的CCL1基因高表达细胞株进行下一步实验。

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1实验材料

1.1实验标本

1.2主要实验试剂

1.3主要试剂的配制

1.4主要仪器设备

2实验方法与步骤

2.1免疫组化染色

2.2间接免疫荧光双标方法

2.3 PCR相关步骤

2.4结果判断标准

3统计学分析和处理

4结 果

4.1 CCL1在正常宫颈、高级别鳞状上皮内病变及宫颈癌组织中的表达

4.2 CCL1在宫颈癌不同组织类型中的表达

4.3 CCL1的表达与宫颈癌临床病理因素的关系

4.4宫颈癌间质内浸润的FOXP3+T细胞数量及其CCR8表达

4.5 CCL1与宫颈癌间质浸润的CCR8+FOXP3+T细胞数量相关性分析

4.6荧光定量PCR结果分析

5讨 论

6结论

全文总结

参考文献

文献综述: 趋化因子及其受体与肿瘤

致谢

攻读学位期间发表的论文