二甲双胍减轻对乙酰氨基酚诱导的中毒性肝炎

摘要

目的：二甲双胍（metformin, MET）是临床上治疗Ⅱ型糖尿病的常用药物。近年来的研究还发现MET具有抗炎、抗氧化作用，这些效应主要依赖于腺苷酸活化蛋白激酶（ AMP activated protein kinase, AMPK）。由对乙酰氨基酚（acetaminophen, APAP）所诱导的急性肝损伤是临床上研究药物性肝炎的重要模型。APAP诱导的急性肝炎与其在肝脏内代谢产生的毒性物质有关,肝细胞内经 CYP450酶系代谢转化APAP可生成高活性的亲电子物 N-乙酰对苯醌亚胺（N-acetyl-p-benzo-quinone imine, NAPQI）。NAPQI可引起肝细胞内的氧化应激和炎症反应并造成肝组织损伤。本文旨在探讨MET对APAP诱导的急性中毒性肝炎的潜在保护效应以及与AMPK之间的关联。
　　方法：雄性昆明小鼠6-8周龄，体重18-20 g，腹腔注射APAP（350 mg/kg，溶于预热的PBS）诱导急性中毒性肝炎。为探讨MET的潜在保护效应，400 mg/kg的MET（溶于PBS）在APAP暴露前0.5 h经腹腔注入。为探讨MET是否通过AMPK发挥效应，一批小鼠在MET注入前0.5 h经腹腔注入AMPK抑制剂dorsomorphin（15 mg/kg，溶于聚乙二醇溶液），另一批小鼠在APAP暴露前0.5 h经腹腔注入AMPK激活剂A-769662（30 mg/kg，溶于聚乙二醇溶液）。各组动物在APAP暴露8 h后处死，及时采集血液样本和肝组织样本。血液样本中 TNF-α和IL-6水平采用ELISA法测定；使用化学显色试剂盒检测血液样本中谷丙、谷草转氨酶水平，检测肝组织中反映脂质氧化的指标丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量及过氧化氢酶（catalase, CAT）活性。肝组织经福尔马林固定后，常规HE染色观察组织病理学变化。
　　结果：本研究发现：①用MET）处理APAP诱导的急性肝炎模型， ALT、AST上升的水平明显受抑，与此相一致的是，小鼠肝组织内MDA水平的降低，血浆中TNF-α和IL-6水平明显下调，以及肝组织病理损伤的减轻；②MET的保肝效应不依赖于 AMPK：AMPK抑制剂Dorsomorphin联合共同处理不能阻断MET对APAP暴露小鼠血ALT、AST上升的抑制效应；而AMPK激活剂A-769662也不能模拟MET对ALT、AST上升的抑制效应。③前期发现CAT可能是MET发挥药理效应的新靶点，MET处理可显著提升肝组织内的 CAT活性，AMPK抑制剂联合处理不能阻断MET对CAT的激活效应，而AMPK激活剂A-769662也不能模拟MET对CAT的激活效应，所以MET以不依赖AMPK的方式激活CAT。
　　结论：本研究数据表明MET对由对APAP诱导的急性中毒性肝炎具有保护作用，这一效应并非通过调节AMPK来实现，可能与其增强CAT活性及提升肝细胞抗氧化能力有关。结合相关文献及本实验室的实验资料：氧化应激是 APAP诱导中毒性肝炎的基本机制，因而我们认为MET对APAP诱导急性中毒性肝炎的保护效应可能与其增强CAT活性有关。由此可见，MET对CAT的激活作用也是其不容忽视的药理学新效应，这对急性重症肝炎防治有一定启示。

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前言

第一节 二甲双胍减轻对乙酰氨基酚诱导的肝损伤

1实验材料与方法

1.1实验动物来源

1.2主要试剂与仪器

2方法

2.1构建动物模型

2.2检测血浆中的ALT、AST水平的影响

2.3检测肝组织中MDA的含量

2.4 ELISA检测TNF-α和IL-6

2.5组织切片的形态学观察

2.6统计学分析

3结果

3.1 MET抑制APAP模型小鼠血浆中的ALT、 AST水平的升高

3.2 MET降低模型小鼠组织中的MDA水平

3.3 MET下调模型小鼠TNF-α和IL-6的水平

3.4 MET减轻模型小鼠肝组织肝脏病理学形态

第二节 二甲双胍的保肝效应不依赖AMPK

1 材料与方法

1.1实验动物来源

1.2试剂与仪器

2方法

2.1分组与样本

2.2检测血浆中的ALT、AST水平的影响

2.3肝组织中CAT含量的检测

2.4统计分析

3结果

3.1 AMPK抑制剂不能阻断MET的保肝效应

3.2 AMPK激活剂不能模拟MET的保肝效应

3.3 MET以不依赖于AMPK 的方式激活CAT

讨论

全文总结

参考文献

文献综述：炎症反应在对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤中的作用

致谢

硕士期间发表论文