脂肪干细胞诱导分化为淋巴管内皮细胞信号通路的探究

摘要

目的：
　　探讨 VEGFR3和 Integrinα9信号通路在血管内皮细胞生长因子 C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C156s)诱导脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）向淋巴管内皮细胞（lymphatic endothelial cells，LECs）早期分化过程中的作用及其对诱导后细胞迁移功能的影响。
　　方法：
　　本实验共分为3个部分
　　（1）取人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived stem cells， HADSCs）随机分为3组：VEGF-C诱导组（含100ng/ml VEGF-C)、VEGF-C加VEGFR3磷酸化酶抑制剂组（含100ng/ml VEGF-C+5umol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制剂MAZ51）、空白对照组（常规DMEM/F12培养基），诱导培养10天后， Western blot检测各组磷酸化VEGFR3(p-VEGFR3)的表达水平（预实验）。
　　（2）另取HADSCs随机分为5组：空白对照组（常规DMEM/F12）、VEGF-C诱导组（含100 ng/ml VEGF-C)、VEGF-C联合抑制剂a组（含100 ng/ml VEGF-C+5 umol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制剂MAZ51）、VEGF-C联合抑制剂 b组（含100 ng/ml VEGF-C+10 ug/ml的Anti-Integrinα9功能封闭性抗体Y9A2）、VEGF-C联合抑制剂a+b组，连续培养10 d后，Western blot和细胞免疫荧光（IF）检测LECs标志性分子VEGFR3、Integrinα9、LYVE-1的相对表达量。
　　（3）把100ng/ml VEGF-C诱导10天后的细胞分别用30ug/ml的Anti-Integrinα9封闭性抗体、5umol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制剂、联合两种抑制剂作用30min，并设置对照组，Transwell小室检测各组细胞迁移数量的变化。
　　结果：
　　（1）5umol/L的 VEGFR3磷酸化酶抑制剂 MAZ51可以明显减弱p-VEGFR3的表达水平（P=0.000）。
　　（2）与诱导组相比，分别阻断VEGFR3和Integrinα9通路都会相应减弱LYVE-1的表达（PWestern=0.000，PIF=0.000），且在上述溶度下两抑制剂对LYVE-1的减弱作用差异无统计学意义（PWestern=0.164﹥0.05，PIF=0.927﹥0.05）；而分别阻断任一通路对另一通路的表达量都没有影响（PWesternVEGFR3(BVSD)=O.804,PIFVEGFR3(BVSD)=O.528,PWesternI ntegrinα9(BVSC)=0.914，PIFIntegrinα9(BVSC)=O.593）。
　　（3）与抑制剂作用之前相比，分别阻断Integrinα9和VEGFR3会使迁移细胞数量相应减少（P=0.000），且在上述溶度下两种阻滞剂对迁移细胞数量的影响无统计学差异（P=0.048﹥0.05）；而同时阻断Integr inα9和VEGFR3会使迁移细胞数量进一步减少（P=0.000）。
　　结论：
　　HADSCs在VEGF-C诱导下向LECs分化过程中有VEGF-C/VEGFR3和VEGF-C/Integrinα9两条独立信号通路；且Integrinα9和VEGFR3在诱导后的细胞的迁移中均发挥重要作用。

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1材料与方法

1.1主要实验试剂和仪器

1.2实验方法

1.3统计学分析

2结 果

2.1 Wsetern blot检测5umol/L VEGFR3磷酸化酶抑制剂的抑制效用

2.2 Wsetern blot检测加入两种抑制剂前后Integrinα9、VEGFR3和LYVE-1的表达变化

2.3细胞免疫荧光检测加入两种抑制剂前后Integrinα9、VEGFR3和LYVE-1的表达变化

2.4 Transwell 小室检测细胞迁移能力的变化

3讨 论

全文总结

参考文献

文献综述: 脂肪干细胞的研究及应用前景

1 ADSCs的培养和纯化

2 ADSCs的鉴定

3脂肪干细胞的临床应用

4 ADSCs的临床应用展望

参考文献

致谢

硕士期间发表论文