低频低强度超声对耻垢分枝杆菌细胞壁通透性影响及协同药物增效的实验研究

摘要

目的：探讨不同辐照剂量的低频低强度超声（Low-frequency and Low-intensity Ultrasound，LFLIU）对耻垢分枝杆菌细胞壁通透性的影响及LF LIU协同药物左氧氟沙星的增效作用。
　　方法：实验选用频率为42 kHz，辐照声强连续可调的（范围为0.13-0.34 W/cm2），换能器直径为45 mm的低频低强度超声设备。选用超声设备的0.14 W/c m2、0.33 W/c m2两个声强分别辐照耻垢分枝杆菌5 min、20 min后用流式细胞仪测菌液的存活率，检测该设备的超声强度对耻垢分枝杆菌活力的影响。之后选用0 W/c m2、0.14 W/c m2、0.19 W/cm2、0.33 W/cm2声强分别辐照经荧光染料双醋酸酯（Fluorescein Diacetate，FDA）、碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）标记过的耻垢分枝杆菌5 min；选用0.14 W/c m2、0.33 W/c m2两个声强分别对经荧光染料标记过的耻垢分枝杆菌辐照0 min、5 min、15 min、20 min后，通过流式细胞仪检测超声辐照前后菌体内荧光染料FDA、PI荧光强度的变化；透射电镜和扫描电镜分别对比观察菌体内部超微结构和菌体表面形态在超声辐照前后的变化。进而选用0.14 W/c m2声强辐照5 min的超声强度协同药物浓度为左氧氟沙星对耻垢分枝杆菌的最低抑菌浓度0.125μg/mL的药物作用于耻垢分枝杆菌，检测其死亡率与单独LFLIU组、单独左氧氟沙星组的差别。并使用被动空化检测系统对所用超声设备在工作声强0.14 W/cm2，及实验条件下的空化作用进行检测。
　　结果：1.经0.14 W/c m2、0.33 W/c m2两个声强分别辐照耻垢分枝杆菌5 min、20 min后，实验组菌液的存活率与对照组的存活率无明显差异（P＞0.05），即该设备在辐照剂量范围内不会杀灭耻垢分枝杆菌；2.经0 W/cm2、0.14 W/cm2、0.19 W/cm2、0.33 W/cm2声强超声分别辐照5 min后，耻垢分枝杆菌体内FDA的荧光强度分别为2299.95±143.07、1384.33±85.23、1051.00±106.0、970.33±58.39，即随着超声辐照声强的增大，菌体内F DA的荧光强度逐渐减弱(P<0.01)；经0 W/c m2、0.14 W/cm2、0.19 W/cm2、0.33 W/cm2声强超声分别辐照5 min后，耻垢分枝杆菌体内PI的荧光强度分别为31.33±1.15、40.33±1.5、49.33±2.5、63.00±1.00，菌体内 P I荧光强度随辐照声强的增大而逐渐增强(P<0.05)；3.经0.14 W/cm2、0.33 W/cm2两个声强分别辐照经荧光染料标记过的耻垢分枝杆菌0 min、5 min、15 min、20 min后，在两种声强辐照过程中菌体内 FDA的荧光强度均随辐照时间的延长而减弱(P<0.01)，PI的荧光强度均随辐照时间的延长而逐渐增强(P<0.05)。4.透射电镜观察到经超声辐照过的耻垢分枝杆菌细胞壁有破裂，且破裂的程度随辐照剂量的增大而增强，菌体内脂滴随辐照强度增强而增多，扫描电镜观察到超声辐照后的菌体外表面有凹陷，且菌体外观形态由标准的椭球形变为一端粗大一端窄小的不规则形状；5.LFLIU协同左氧氟沙星作用于耻垢分枝杆菌24 h后，其死亡率（86.77±0.72％）高于单独LFLIU组（45.60±3.80%）和单独左氧氟沙星组（79.98±1.97%）(P<0.05)；6.被动空化检测系统检测出所用超声设备在0.14 W/cm2辐照过程中有明显的次谐波产生，表明产生了空化作用。
　　结论：一定剂量的LF LIU超声可增加耻垢分枝杆菌细胞壁的通透性，且LF LIU协同药物左氧氟沙星有杀菌增效作用。

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前言

第一部分：低频低强度超声对耻垢分枝杆菌细胞壁通透性的影响

1 材料和方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第二部分：低频低强度超声协同左氧氟沙星对耻垢分枝杆菌的增效作用研究

1材料和方法

2 实验结果

3讨论

4 小结

第三部分：低频低强度超声仪空化效应检测

1材料和方法

2 实验结果

3讨论

4 小结

全文总结

参考文献

文献综述: 结核病的治疗现状

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文