利奈唑胺耐药肠球菌危险因素调查及万古霉素耐药屎肠球菌毒力因子和转座子结构分析

摘要

目的：探讨2012-2013年我院利奈唑胺耐药肠球菌（Linezolid-resistant enterococci，LRE）感染危险因素以及万古霉素耐药屎肠球菌(Vancomycin-resistant Enterococcus faecium，VREfm)的耐药基因、毒力因子表达和转座子结构分析。
　　方法：采用病例-对照回顾性分析对我院2012年至2013年分离的LRE进行相关危险因素调查。同时，该段时间段内分离的VREfm采用微量肉汤稀释法进行验证，采用梅里埃VITEK2对各种抗生素进行药敏检测，采用PCR（Polymerase chain reaction，PCR）及测序技术检测菌株中的万古霉素耐药基因vanA、vanB和vanC和毒力因子asa1、acm、cylA、esp、gelE、hyl、sagA的表达情况，以及采用引物重叠PCR的方法进行转座子结构分析。
　　结果：1. LRE危险因素调查结果显示，肠道灌洗、入住ICU、利奈唑胺先前使用是其独立危险因素。
　　2.2012年至2013年我院共检出肠球菌1462株，VREfm18株，约占1.23％。VREfm主要分离自尿液标本（14株，77.8%），医院科室分布主要来自神经内科（6株，33.3%）和呼吸内科（4株，22.2%）。
　　3.药敏结果显示：18例VREfm分离株对替考拉宁以及万古霉素均表现较高程度耐药（TEC≥32μg/ml、VAN≥128μg/ml），属于vanA表型耐药。全部菌株对青霉素、左氧氟沙星、氨苄西林、环丙沙星、红霉素均呈现耐药，对利奈唑胺、替加环素、奎奴普丁-达福普汀的敏感率高达100%，其中约有77.8%的菌株对四环素表现敏感。本研究还发现18例VREfm分离株均为多重耐药菌株。
　　4.毒力因子检测结果显示，18株VREfm实验组中acm、esp、hyl三种毒力因子检出率相对较高，分别为94.4%（17/18）、88.9%（16/18）、83.3%（15/18），而在72株VSEfm对照组中这三种毒力因子的检出率分别为61.1%（44/72）、54.2%（39/72）以及55.6%（40/72），并且具有统计学意义。从毒力因子联合表达来看，实验组中同时表达这三种毒力因子的菌株约占77.8%，而在对照组中该比例仅占36.1%。
　　5.转座子Tn1546结构分析显示，我院18株VREfm可分为四个型别，其中C型所占比例最多（8/18），其余类型为D型(6/18)、B型(2/18)和A型(2/18)。
　　结论：我院VREfm菌株主要分离自尿液标本，标本的病区来源以神经内科为主；这些菌株对替考拉宁和万古霉素均呈现较高程度耐药且所有菌株均存在多重耐药现象。我院VREfm菌株均为vanA型，未发现vanB和vanC等其他类型菌株存在。从毒力因子分布来看，我院VREfm菌株以acm、esp、hyl三种毒力因子为主且多数菌株存在三种毒力因子共表达的现象。转座子Tn1546共检测到四种型别。从利奈唑胺耐药肠球菌的危险因素调查结果来看，侵入性操作和先前抗生素是其主要的危险因子，因此，建议临床可根据肠球菌感染的危险因素结果，更合理、更有效地优化抗生素治疗方案，从而减少耐药菌的产生和流行。