Wnt/β-catenin信号通路在心肌慢性缺氧适应中的作用及机制

摘要

背景及目的：
　　心肌在慢性缺氧时可以诱导机体产生内源性保护机制适应缺氧，以抵御或减轻缺氧造成的损伤，但目前心肌慢性缺氧适应机制仍不清楚。本研究以低氧条件下培养H9c2心肌细胞及青紫型先心病为研究对象，探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在 H9c2心肌细胞株及青紫型先天性心脏病心肌慢性缺氧适应中的作用及机制。
　　方法：
　　（1）5%氧浓度下培养H9c2心肌细胞72 h，采用Western blotting和 Real-time PCR技术检测Wnt/β-catenin信号转导通路核心分子β-catenin及抗凋亡因子bcl-2、survivin在低氧培养6 h、12 h、24 h、36h、48 h及72 h时蛋白及基因表达变化，以正常氧浓度下培养H9c2细胞做为对照组。
　　（2）收集先心病患儿38例，非青紫型23例，青紫型15例，体外循环前留取右心耳组织，采用Western blotting、免疫组织化学技术检测先心病患儿心脏组织中β-catenin蛋白表达水平，并分析心脏组织中β-catenin表达水平随患儿年龄的变化，非青紫型先心病做为对照组。
　　结果：
　　（1）随着缺氧时间延长β-catenin mRNA表达呈先增后降的趋势，与对照组相比，缺氧12 h、24 h、36 h时β-catenin mRNA表达明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.05），而48 h、72 h时表达水平下降，与12 h、24 h及36 h相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。
　　（2）β-catenin蛋白在缺氧6 h、12 h、24 h、36 h时表达明显增加，其中36 h时表达最高，与对照组相比，差异均具有统计学意义（P＜0.001、P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001）。48 h、72 h表达水平较36 h明显下降（P＜0.001），基本降至对照组水平。随低氧培养时间延长，β-catenin蛋白表达也呈先升后降趋势。
　　（3）bcl-2 mRNA于缺氧培养6 h、12 h时表达较对照组显著增加（均P＜0.001），此后下降，36 h时表达降至最低水平。bcl-2蛋白在培养6 h、12 h、24 h时表达明显增加（P＜0.001、P＜0.001、P＜0.001）。
　　（4）与对照组相比，survivin mRNA表达水平于培养24 h明显增加（P＜0.001）。同样，survivin蛋白在培养12 h、24 h时表达显著增加，24 h时表达最高（P＜0.001、P＜0.001）。
　　（5）青紫组β-catenin表达水平较非青紫组低（P＜0.001）；β-catenin蛋白随患儿年龄增加表达下降（P＜0.001、P＜0.001），青紫组及非青紫组变化趋势一致；同年龄段青紫组患儿心脏组织β-catenin表达较非青紫组低（P＜0.05、P＜0.001、P＜0.01）。
　　结论：
　　（1）Wnt/β-catenin信号通路激活可能是H9c2心肌细胞慢性缺氧适应机制之一，其部分可能通过上调抗凋亡因子bcl-2及survivin表达起作用。
　　（2）Wnt/β-catenin信号通路可能不是本研究中所处年龄段青紫型先心病患儿慢性缺氧适应主要信号通路，其与青紫型先心病心肌慢性缺氧适应的关系有待后续实验进一步研究。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分：Wnt/β-catenin信号通路在H9c2心肌细胞慢性缺氧适应中的作用及机制

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3 统计分析

2 实验结果

2.1 H9c2心肌细胞培养

2.2 5%氧浓度下培养H9c2细胞不同时间细胞形态

2.3 Western blotting检测5% 氧浓度下培养H9c2心肌细胞不同时间β-catenin蛋白表达变化

2.4 5% 氧浓度下培养H9c2心肌细胞不同时间β-catenin mRNA表达

2.5 5% 氧浓度下培养H9c2心肌细胞不同时间bcl-2表达

2.6 5% 氧浓度下H9c2心肌细胞不同时间survivin表达变化

3讨论

4 结论

第二部分 wnt/β-catenin信号通路在青紫型先心病心肌慢性缺氧适应中的作用

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3 统计分析

2实验结果

2.1青紫组与非青紫组先心病患儿一般资料

2.2 青紫组与非青紫组先心病心脏组织β-catenin蛋白表达水平

2.3 肺动脉高压对非青紫组先心病心脏组织中β-catenin 蛋白表达影响

2.4 青紫组及非青紫组先心病心脏组织中β-catenin 蛋白表达与患儿病程关系

3 讨论

4 总结

全文总结

参考文献

文献综述:Wnt信号通路与心脏发育及心血管系统疾病

致谢

攻读学位期间科研情况介绍