SAHA与顺铂联合应用对人骨肉瘤细胞株143B增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究

摘要

研究背景：
　　骨肉瘤是最常发生的原发性骨肿瘤，恶性程度极高，多发生于儿童、青少年。顺铂（cisplatin, CDDP）作为一种一线化疗药物，已经被广泛应用于骨肉瘤的治疗，但是药物的副作用（如肾毒性和耳毒性）和耐药性限制了顺铂在临床上的应用。SAHA作为一种新兴的组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histonedeacetylase inhibitors,HDACIs），已经被美国食品药品管理局（Food and Drug Administration,FDA）批准为第一个用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma，CTCL)的HDACI。然而，SAHA单独用于治疗时的疗效十分有限，特别是用于实体肿瘤时。
　　目的：
　　研究SAHA与顺铂联用对人骨肉瘤细胞株143B的增殖、凋亡和迁移作用的影响，并探讨其分子机制。
　　方法：
　　1.SAHA与CDDP单独应用和联合应用对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响：骨肉瘤143B细胞分别经不同浓度的SAHA、CDDP、SAHA+CDDP作用48 h。采用倒置普通显微镜观察细胞的形态学改变；采用MTT法检测细胞活力的改变并采用Chou-Talalay法计算两药联合指数（Combination index,CI）；采用流式细胞术（Flow cytometer,FCM）检测细胞的周期阻滞和凋亡的改变；采用克隆形成实验检测细胞集落形成能力的改变；采用划痕实验检测对细胞迁移能力的影响。
　　2.生物信息学筛选 SAHA、CDDP共同作用基因以及信号通路并进行网络分析：通过比较毒物基因组学数据库（Comparative Toxicogenomics Database,CTD）检索受SAHA、CDDP调控的基因和通路，利用在线韦恩工具对其共同靶基因和通路进行富集；并用Cytoscape3.4.0对共有靶基因进行网络分析及预测。
　　3.SAHA与CDDP联合作用对人骨肉瘤143B细胞中凋亡相关蛋白以及凋亡信号通路的影响：骨肉瘤143B细胞分别经SAHA、CDDP、SAHA+CDDP处理48 h后，采用Western blot检测Bcl-2和Bax的表达；采用Western blot检测 cleaved-Caspase-3，cleaved-Caspase-8和cleaved-PARP的表达。
　　结果：
　　1.SAHA+CDDP处理组中骨肉瘤143B细胞大量坏死，细胞增殖的抑制较单药组显著，且两药为协同作用关系；FCM结果证实SAHA+CDDP能够使细胞阻滞于S期，细胞早期凋亡率明显增加；SAHA+CDDP处理组的克隆形成能力与细胞迁移能力结果亦明显低于单药组。
　　2.通路富集结果显示，骨肉瘤发生过程中受SAHA、CDDP共同调控的通路共有78条；药物作用网络显示，共有12个共同基因同时受SAHA、CDDP调节。
　　3.143B细胞经SAHA+CDDP处理48 h后促凋亡因子Bax表达水平较对照组与单药组上调（P＜0.05，P＜0.05），抗凋亡因子Bcl-2表达水平下降（P＜0.05，P＜0.05）。同时，SAHA+CDDP处理组中凋亡信号通路相关蛋白cleaved-Caspase-3，cleaved-Caspase-8和cleaved-PARP表达水平较对照组与单药组上调（P＜0.05，P＜0.05）。
　　结论：
　　1.SAHA与CDDP联合应用能够显著抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖，促进其凋亡，且两者具有协同性。
　　2.SAHA与CDDP联合应用能够显著抑制人骨肉瘤143B细胞的克隆形成能力与细胞迁移能力。
　　3.SAHA与CDDP联合应用可以协同调控多条信号通路。
　　4.SAHA与CDDP联合应用引起的骨肉瘤143B细胞凋亡过程中，能够改变Caspases家族、Bcl-2家族相关凋亡蛋白的表达。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 SAHA与顺铂联合应用对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和迁移的研究

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分 SAHA与顺铂联合应用对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡的分子机制的初步研究

1材料和方法

2结果

3讨论

全文总结

文献综述:蛋白去乙酰化酶抑制剂HDACIs联合应用治疗肿瘤的研究新进展

致谢

硕士期间发表的论文