Rce1在肾细胞癌中的表达及其通过内质网应激对肾癌细胞786-O凋亡的调节

摘要

目的：
　　Rce1(Ras and a-factor-converting enzyme1)是一种位于内质网（Endoplasmic Reticulum，ER）膜上的驻留蛋白酶，负责绝大多数CAAX类蛋白的加工。内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）在肾细胞癌（Renal Cell Carcinoma,RCC）发展过程中起重要作用；然而在肾细胞癌中，Rce1的表达，及其与内质网应激作用机制间的关系尚未得到深入研究。本实验旨在探讨Rce1在肾细胞癌中的表达及其通过ERS诱导肾癌细胞786-O凋亡的分子机制。
　　方法：
　　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白质免疫印记杂交（western blot）及免疫组化技术（Immunohistochemical）检测肾细胞癌组织及相应癌旁组织中Rce1表达情况。采用qRT-PCR和western blot技术检测人胚肾细胞株HEK293及肾癌细胞株786-O、ACHN、A498中Rce1表达差异情况。shRNA慢病毒干扰载体感染786-O细胞，敲降Rce1表达水平，应用流式细胞术（FCM）及CCK-8检测786-O细胞凋亡和增值改变情况。采用western blot技术检测Rce1敲降前后，786-O细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激相关蛋白的变化情况。
　　结果：
　　Rce1的表达水平，相较于肾细胞癌旁组织，在肾细胞癌组织中明显上调，其阳性表达水平与患者临床病理特征密切相关。Rce1在人肾癌细胞株中表达上调，尤其是786-O细胞。慢病毒敲降786-O细胞中Rce1表达后，细胞凋亡增加，抑制被增殖（P＜0.05）。此外，敲降Rce1后，促凋亡蛋白Bax的表达上调，抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调。进一步研究表明，Rce1的下调也影响内质网应激因子的表达。
　　结论：
　　Rce1在肾细胞癌的发生发展中发挥重要作用。Rce1低表达可以通过内质网应激使肾癌细胞的凋亡增加并抑制肾癌细胞增殖。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料与方法

1.1主要仪器设备及分析软件

1.2材料

1.3方法

2结果

2.1在肾细胞癌组织及癌旁组织中表达及其与肾细胞癌临床病理特征

2.2敲降Rce1对肾癌细胞786-O凋亡的影响

2.3下调Rce1通过内质网应激激活PERK-eIF2α-ATF4信号通路

3讨论

4结论

参考文献

文献综述:内质网应激PERK信号通路在肿瘤中的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文