日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3)疫苗的构建及其表达

摘要

目的：日本血吸虫病是一种由日本血吸虫（Sj）感染引起的的慢性寄生虫病，主要流行于印尼、中国、菲律宾等亚洲国家和地区，是我国重点防治的公共卫生问题之一。多年来我国防控血吸虫病主要利用药物治疗、灭螺、健康教育以及环境改造等综合措施，并且取得了显著的成就。但是这些措施不能完全消灭血吸虫病，研制疫苗成为防控该病的重要战略措施。本实验利用Sj谷胱甘肽-S-转移酶（Sj26GST）和信号转导蛋白（Sj14-3-3）两种抗原分子的编码基因进行拼接，并以两歧双歧杆菌（Bb）为载体，构建日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3）疫苗，研究该融合基因在两歧双歧杆菌中的表达效率，为下一步疫苗免疫机制的研究打下基础。
　　方法：以本室构建并保存的重组质粒pET28α-Sj26GST和pET28α-Sj14-3-3为模板，PCR扩增Sj26GST和Sj14-3-3两种目的基因，然后将扩增的两种基因通过基因拼接法进行融合，构建Sj26GST-Sj14-3-341.重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3构建成功，且该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中可得到表达，表达的蛋白具有抗原特异性。融合基因。再将其插入穿梭表达载体 pGEX-1λT，获得重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3，然后将该质粒电穿孔导入大肠埃希菌 BL21（DE3）后利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达；其诱导产物的分析和鉴定采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法（Westernblot）。将重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3电穿孔导入Bb中，构建重组Bb（pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3）疫苗后经IPTG对该疫苗诱导表达，其诱导产物利用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。
　　结果：琼脂糖凝胶电泳显示成功获得长度为1120bp的Sj26GST-Sj14-3-3融合基因，并构建了重组表达质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3；SDS-PAGE结果显示该重组质粒诱导表达产物的Mr约67kDa，其表达水平在诱导5~7h后较高，构建质粒所表达的融合蛋白占菌体总蛋白的19%；Westernblot分析显示Sj感染的兔血清可识别该表达蛋白。PCR及双酶切均显示Bb中被成功导入重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3。SDS-PAGE显示该重组质粒诱导表达产物的Mr约67kDa，其表达水平在诱导3~4d后较高，导入的重组质粒所表达的融合蛋白占菌体总蛋白的7.9%；Westernblot显示该蛋白能被 Sj感染的兔血清识别。
　　结论：⑴重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3构建成功，且该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中可得到表达，表达的蛋白具有抗原特异性。⑵成功构建日本血吸虫重组 Bb(pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3)疫苗，该疫苗可表达具有特异抗原性的Sj26GST-Sj14-3-3重组蛋白。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一章 日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二章 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj14-3-3)疫苗的构建及其表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文小结

文献综述:血吸虫抱雌沟蛋白疫苗研究现状

致谢

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