MicroRNA-340在肝细胞肝癌中的表达及作用

摘要

背景： MicroRNAs是一类短RNAs，它在肝细胞肝癌的起源和演化中起重要的作用。MiR-340是在结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌中新发现的一种肿瘤抑制物。然而，miR-340与肝细胞肝癌之间的关系并没有相关研究。本研究旨在探讨miR-340在肝细胞肝癌中的表达及作用。 方法： 采用qRT-PCR技术检测miR-340在4种肝癌细胞系（HepG2，Hep3B，Bel-7402，SMMC-7721）和1种正常肝细胞系（HL-7702）以及经术后病理检查确认的HCC病人手术后切除的标本中的表达量，通过四格表的卡方检验分析标本中miR-340的表达量与HCC患者的年龄、性别、乙肝表面抗原、HBV DNA、甲胎蛋白、ALT、AST、肿瘤大小、肝硬化、肿瘤分期的关系。通过瞬时转染技术增加或者降低SMMC-7721细胞系中miR-340的表达量后再使用CCK-8技术以及流式细胞技术研究miR-340对肝癌细胞增殖和凋亡的影响，通过Transwell实验探究miR-340对肝癌细胞迁移和转移的影响。最后，通过qRT-PCR和Western Blot技术探讨miR-340在肝细胞肝癌发生发展中的可能机制。 结果： qRT-PCR结果显示miR-340在4种肝癌细胞系中（Hep3B，Bel-7402，HepG2，SMMC-7721）均呈现低表达，其表达量的降低相对于正常肝细胞系（HL-7702）均具有统计学意义（p值分别为p＜0.05，p＜0.001，p＜0.001，p＜0.001），其中SMMC-7721细胞系中的miR-340表达量最低，故选取该细胞系作为下游细胞功能学实验的对象。miR-340在45对标本癌旁组织中的表达均高于癌组织（p＜0.05）。通过统计学分析发现，miR-340在所有45对标本中癌旁组织的表达量高于癌组织，差异具有统计学意义（p＜0.001）。miR-340表达量的高低还与乙肝表面抗原阳性（p=0.01）或乙肝病毒载量高于正常（p=0.002）以及肝癌的大小（≥5 cm）（p=0.001）和高TNM分期（Ⅲ期）（p=0.002）有关，而与年龄（p=0.751）、性别（p=0.179）、甲胎蛋白（p=0.079）、ALT（p=0.6）、AST（p=1.0）、肝硬化（p=0.053）无关。CCK-8结果显示调高miR-340的表达量之后，miR-340 mimic组在24小时、48小时、72小时三个时间点处的存活率低于 miR-340 mimic control组，调低miR-340的表达量之后，miR-340 inhibitor组在24小时、48小时、72小时三个时间点处的存活率高于于miR-340 inhibitor control组。流式细胞检测表明调高miR-340的表达量之后，miR-340 mimic组细胞的凋亡率高于miR-340 mimic control组（p＜0.01），调低miR-340的表达量之后，miR-340 inhibitor组细胞的凋亡率低于miR-340 inhibitor control组（p＜0.001）。Transwell实验表明，调高 miR-340的表达量之后，miR-340 mimic组细胞的迁移和转移细胞数低于miR-340 mimic control组（p＜0.001），调低miR-340的表达量之后，miR-340 inhibitor组细胞的迁移和转移细胞数高于miR-340 inhibitor control组（p＜0.001）。qRT-PCR和Western Blot实验表明调高miR-340的表达量之后，miR-340 mimic组细胞中的SKP2 mRNA和蛋白质的表达低于miR-340 mimic control组（p＜0.05），调低miR-340的表达量之后，miR-340 inhibitor组细胞中的SKP2 mRNA和蛋白质的表达高于miR-340 inhibitor control组。 结论： 通过实验结果发现相对与正常肝细胞系（HL-7702）和HCC患者癌旁组织，miR-340在四种肝癌细胞系（Hep3B，Bel-7402，HepG2，SMMC-7721）和HCC患者癌组织中的表达降低。MiR-340的表达量与HCC患者的乙肝表面抗原、HBV DNA、较大的肿瘤（≥5 cm）以及肿瘤晚期（TNMⅢ期）有关。并且miR-340会抑制肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移、转移并能促进该细胞凋亡，也就是说miR-340在HCC发展中发挥了抑癌基因的作用。其作用机制可能是miR-340抑制SKP2的表达进而导致上述的细胞生物学改变。本研究表明miR-340作为一种抑癌基因参与了HCC的发生发展，并且其表达量可能与HBV的感染有关，通过进一步研究也许能够通过该基因的表达量推测病人的病情严重程度和预后。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

参考文献

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1 miR-340在肝癌细胞和组织中的表达情况

2.2 miR-340在肝癌细胞中影响细胞的增殖和凋亡

2.3 miR-340在肝癌细胞中影响细胞的迁移和侵袭

2.4 miR-340在肝癌细胞中能够影响SKP2的表达

3讨论

3.1 MiR-340的研究现状

3.2本研究发现miR-340在HCC中有抑癌作用

3.3 MiR-340抑制HCC发生发展的可能机制

参考文献

全文总结

附图

文献综述：MiRNA在HBx蛋白诱导的肝细胞肝癌中的作用

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章