骨形态发生蛋白9促进小鼠颅骨间充质祖细胞成骨分化的实验研究

摘要

目的：
　　研究腺病毒载体介导的骨形态发生蛋白9对永生化的小鼠颅骨间充质祖细胞成骨分化的诱导作用。
　　方法：
　　以iCALs为种子细胞，设置GFP对照组和BMP-9诱导组，于病毒感染后的3、5、7d对早期成骨分化指标碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性进行定性和定量检测；在感染后14d由茜素红染色检测骨钙结节形成；荧光定量PCR法检测成骨细胞分化标志基因Runx2、OCN的表达情况，westernblot检测Runx2、OCN表达情况。
　　结果：
　　BMP-9诱导组细胞内ALP活性高于GFP对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；BMP-9诱导组形成较多的钙盐结节沉积；荧光定量PCR检测结果显示刺激组中Runx2、OCN的mRNA表达量明显上调，差异具有统计学意义（P＜0.05），western blot检测3天Runx2蛋白表达上调，5天OCN蛋白表达上调。
　　结论：
　　BMP-9能促进永生化的小鼠颅骨祖细胞成骨分化。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料

1.1细胞来源

1.2主要试剂

2方法

2.1细胞培养和传代

2.2腺病毒扩增及提取

2.3 ALP定量试验方法

2.4 ALP染色检测

2.5茜素红S染色检测

2.6提取RNA和qRT-PCR检测成骨基因表达

2.7蛋白检测

2.8实验数据统计

3实验结果

3.1病毒感染

3.2碱性磷酸酶活性定量分析

3.3碱性磷酸酶活性定性染色

3.4茜素红染色

3.5 qRT-PCR 检测成骨基因Runx2、OCN的表达

3.6 Western blot检测Runx2、OCN的表达

4讨论

全文总结

参考文献

文献综述:骨形态发生蛋白9的研究进展

致谢

攻读学位期间发表论文情况