INPP4B介导激活SGK3促进NPM1突变白血病细胞存活的作用研究

摘要

目的：急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia，AML）是一组具有高度异质性的血液系统恶性肿瘤。近一半的AML患者表现为染色体核型正常（normal karyotype AML，NK-AML）。已知多种基因突变与NK-AML的发生密切相关。核仁磷酸蛋白（nucleophosmin，NPM1）突变是NK-AML中突变频率最高的基因之一，NPM1突变白血病已被2016年WHO白血病分型指南正式纳入为AML的一个独特亚型。然而，引起NPM1突变白血病恶性增殖的分子机制尚未完全阐明。II型磷脂酰肌醇4-磷酸酶（Inositol polyphospHate4-phospHatase type II，INPP4B）是PI3K信号通路上的一种负调控因子，可通过抑制AKT的活化发挥抑癌作用。最近，来自白血病患者的临床研究发现，INPP4B在部分AML患者中高表达并表现出较差的存活率。然而，目前 INPP4B在NPM1突变白血病细胞中的生物学作用及分子机制尚不清楚。因此，本研究旨在探讨INPP4B对NPM1突变白血病细胞恶性增殖的影响及其潜在分子机制，并进一步观察INPP4B对NPM1突变白血病患者临床预后的影响。 方法：收集TCGA数据库中171位AML患者的RNA-seq数据并分析INPP4B的表达水平。采用qRT-PCR和western blot观察白血病细胞中INPP4B的mRNA和蛋白表达水平。采用CCK8和集落形成实验检测INPP4B表达对OCI-AML3细胞体外增殖的影响。通过western blot检测SGK3和AKT蛋白磷酸化水平的改变。此外，采用ELISA分析过表达INPP4B后白血病细胞中PI(3,4)P2和PI(3)P水平的变化。通过siRNA和rescue实验观察SGK3在INPP4B介导的细胞增殖中的作用。观察干扰或过表达NPM1-mA（NPM1 type A mutation）后白血病细胞中 INPP4B表达的改变。接着，观察干扰 Ets-1或使用 ERK抑制剂PD98059对OCI-AML3细胞INPP4B mRNA和蛋白水平的影响。最后，收集 TCGA数据库中 NPM1突变 AML病例临床信息，采用Kaplan-Meier生存分析INPP4B表达对NPM1突变AML患者临床预后的影响。 结果：首先，在NPM1突变白血病细胞中观察到INPP4B mRNA和蛋白高表达。干扰INPP4B能够抑制OCI-AML3细胞的体外增殖，而恢复INPP4B的表达可逆转这种抑制效应。其次，过表达INPP4B可上调OCI-AML3和THP-1细胞中SGK3的磷酸化（p-SGK3）水平，但不影响 AKT的活化；反之亦然。接着，干扰 SGK3可减弱 OCI-AML3细胞的体外增殖能力，而rescue实验观察到恢复SGK3表达后能够逆转INPP4B下调导致的细胞生长抑制。此外，证实了NPM1-mA可通过ERK/Ets-1信号通路上调 OCI-AML3中 INPP4B的表达。同时，干扰NPM1-mA能够抑制OCI-AML3细胞的体外增殖，而回复INPP4B表达可逆转这种抑制效应。最后， Kaplan-Meier生存分析结果表明，高INPP4B组 NPM1突变白血病样本总体生存率和三年无病生存率均显著降低。 结论：INPP4B在NPM1突变白血病细胞中高表达并可促进其体外增殖，这可能与SGK3激活而非AKT有关。同时，NPM1-mA可通过ERK/Ets-1通路上调白血病细胞INPP4B的表达。此外，INPP4B高表达与NPM1突变白血病患者预后不良密切相关。深入研究INPP4B在NPM1突变白血病中的作用机制可能为临床该型白血病的诊治提供理论依据及潜在靶点。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

第二部分 探讨INPP4B促进NPM1突变白血病细胞体外增殖的分子机制

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

第三部分 探讨NPM1突变调控白血病细胞INPP4B高表达的分子机制

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

第四部分 INPP4B高表达对NPM1突变白血病临床预后的影响

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:INPP4B在肿瘤中的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的相关文章及课题