侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响

摘要

背景： 新生儿期严重炎症反应和菌血症是新生儿脑白质损伤的重要危险因素[1]，其机制与少突胶质细胞（Oligodendrocyte, OL）成熟障碍有关[2]。少突胶质细胞是组成神经系统的细胞之一，miR-219是少突胶质细胞特异性的 miRNA，也是分化中的少突胶质细胞表达最强的miRNA[3,4]。此外，Dugas在体外实验中发现miR-219可促进少突胶质祖细胞（Oligodendrocyte progenitor cell, OPC）向少突胶质细胞分化[3]。基于miRNA的治疗是目前各类疾病治疗的研究热点，已有多项研究显示侧脑室注射miRNA激动剂或抑制剂对脑损伤有治疗作用[5,6]。但miR-219对炎症所致新生儿脑白质损伤的影响，目前尚不清楚。 目的: 探讨侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响。 方法： ①将出生2 d的Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为2组。脂多糖组（LPS组）：腹腔注射0.25 mg/kg LPS；对照组：腹腔注射等体积生理盐水。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测脑组织中miR-219和IL-1β（白介素-1β）mRNA的表达，苏木素伊红（hematoxylin-eosin， HE）染色和尼氏染色观察脑白质的病理改变。 ②将出生2 d的SD大鼠随机分为4组。对照组：腹腔注射等体积生理盐水，24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照。脂多糖组（LPS组）：腹腔注射0.25 mg/kg LPS，24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照；miR-219激动剂组（miR-219组）：腹腔注射等体积的生理盐水，24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂；LPS加 miR-219激动剂组（LPS+miR-219组）：腹腔注射0.25 mg/kg LPS，24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂。RT-qPCR检测脑组织中miR-219和髓鞘性蛋白（myelin basic protein, MBP）mRNA的表达，免疫荧光观察成熟少突胶质细胞标记物 MBP和少突胶质细胞祖细胞标记物血小板源性生长因子受体α（Platelet-derived growth factor receptor-alpha，PDGFRα）的表达，免疫印迹法（western blotting，WB）检测脑组织内MBP、PDGFRα和少突胶质细胞分化抑制因子Sox6蛋白的表达。 结果： ①腹腔注射LPS后，LPS组脑组织内IL-1β的表达增加（P＜0.05），miR-219表达降低（P＜0.05），LPS组脑白质区组织结构疏松，细胞核固缩，尼氏体减少。 ②腹腔注射 LPS后，LPS组脑组织内成熟少突胶质细胞标志物MBP的表达显著下降，少突胶质细胞祖细胞标志物PDGFRα和少突胶质细胞分化抑制因子Sox6表达明显增多（P＜0.05）；侧脑室注射miR-219激动剂后，miR-219组miR-219的表达增高（P＜0.05）；相较于LPS组，LPS+miR-219组MBP表达增多，PDGFRα和Sox6表达显著降低（P＜0.05），且与对照组无明显差异（P＞0.05）。 结论： ①腹腔注射LPS可导致新生SD大鼠脑白质损伤，miR-219表达降低。 ②腹腔注射LPS可导致新生SD大鼠少突胶质细胞成熟障碍，若给予侧脑室注射miR-219激动剂，可提高新生SD大鼠miR-219的表达，降低 Sox6的表达，从而改善 LPS致新生鼠少突胶质细胞成熟障碍。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 腹腔注射LPS对新生鼠脑白质的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第二部分 侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

全文总结

参考文献

文献综述:microRNA在常见中枢神经系统疾病中的作用

致谢

攻读研究生期间的研究成果及发表的论文