几丁糖抑制甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞炎症因子和脂肪生成的作用及机制研究

摘要

目的:几丁糖是作用很广的天然提取产物，临床适应症主要为防治外科术后组织粘连，在眼科被用于抑制视网膜炎症等研究。甲状腺相关性眼病（GO）病理表现为眼眶炎症和眶周软组织大量重构，目前几丁糖在甲状腺相关性眼病中的作用，尚不清楚。本课题选取 GO眼眶成纤维细胞为研究对象，从眼眶成纤维细胞炎症因子及脂肪生成的角度探讨几丁糖在甲状腺相关性眼病中的作用及机制。 方法:原代培养GO眼眶成纤维细胞。通过CCK-8（Cell Counting Kit-8）、流式细胞仪检测凋亡及细胞周期来评价不同浓度几丁糖对眼眶成纤维细胞活性影响。通过IL-1β与几丁糖共培养眼眶成纤维细胞，用酶联免疫吸附实验（ ELISA）检测不同时间点细胞上清液中interleukin-6(IL-6)和prostaglandin E-2(PGE-2)蛋白水平。通过实时定量PCR（real-time PCR）和Western-Blot检测cyclooxygenase-2(COX-2)表达水平。Western-Blot检测JNK信号通路磷酸化水平。在脂肪诱导培养基中，对眼眶成纤维细胞进行脂肪细胞分化诱导，采用几丁糖进行干预处理。油红染色观察脂肪细胞生成情况，Western-Blot检测FABP-4, adiponectin, C/EBPα和PPAR-γ等蛋白表达水平和AKT信号通路磷酸化水平。 结果:0.1mg/ml和0.01mg/ml几丁糖对眼眶成纤维细胞活性无影响。IL-1β可诱导眼眶成纤维细胞 IL-6和 PGE-2蛋白生成增加。几丁糖可明显抑制IL-1β诱导的IL-6和 PGE-2蛋白产生，降低COX-2 mRNA和蛋白表达。JNK抑制剂可减少IL-6和 PGE-2蛋白产生。几丁糖可抑制 JNK信号通路磷酸化。油红染色表明几丁糖可明显抑制眼眶成纤维细胞向脂肪细胞分化，减少脂肪细胞生成，同时抑制FABP-4,adiponectin,C/EBPα和 PPAR-γ等蛋白表达水平，降低 AKT磷酸化水平。 结论:几丁糖可明显抑制眼眶成纤维细胞炎症因子和脂肪生成，其机制可能分别与降低JNK和AKT磷酸化水平有关。

目录

声明

符号说明

前言

参考文献

第一部分 甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞原代培养

前言

1材料和方法

2结果

3结论

4讨论

参考文献

附图

第二部分 几丁糖对眼眶成纤维细胞活性影响

前言

1材料和方法

2统计学方法

3结果

4结论

5讨论

参考文献

附图

第三部分 几丁糖抑制IL-1β诱导眼眶成纤维细胞炎症因子的作用及机制研究

前言

1材料和方法

2统计学方法

3结果

4结论

5讨论

参考文献

附图

第四部分 几丁糖抑制眼眶成纤维细胞脂肪生成的作用及机制研究

前言

1材料和方法

2统计学方法

3结果

4结论

5讨论

参考文献

附图

全文总结

文献综述:几丁糖作用及机制研究进展

致谢

攻读博士学位期间发表的学术论文、参研项目目录