TCDD诱导胎鼠腭裂过程中组蛋白H4乙酰化与TβRs基因变化的实验研究

摘要

第一部分 TCDD诱导胎鼠腭裂过程中组蛋白H4乙酰化的表达 目的：研究由环境污染物2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, TCDD)诱导胎鼠腭裂发生过程中，组蛋白H4乙酰化在腭突中的表达，探讨组蛋白H4乙酰化在胎鼠腭裂发生中的可能机制。 方法：48只C57BL/6J近交系孕鼠完全随机分为实验组和对照组，小鼠孕10.5天（gestation day，GD10.5）时，一次性给予孕鼠分别灌服20ug/kg TCDD（实验组）和等剂量玉米油（对照组），分别在GD13.5、GD14.5、GD15.5剖腹取胎鼠头部标本，作冠状位组织切片，采用免疫组织化学染色观察组蛋白H4乙酰化在腭突中的表达，Western Blot检测胎鼠腭组织组蛋白H4乙酰化的相对表达量。 结果： TCDD组24只孕鼠获得活胎160只，活胎腭裂发生率为100%；对照组24只孕鼠获得活胎178只，活胎腭裂发生率为0。TCDD组24只孕鼠获得活胎160只，死胎和吸收胎12只，活胎腭裂发生率为100%，均为完全腭裂组蛋白H4乙酰化主要表达在腭突上皮细胞中，间质细胞少许表达；在腭发育各个主要时期GD13.5、GD14.5、GD15.5腭突上皮细胞的相对表达量分别是：对照组为0.60±0.25，0.92±0.09and0.90±0.09；TCDD组为1.02±0.28，1.61±0.27 and1.28±0.13，对照组与实验组差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论：TCDD诱导的C57BL/6J胎鼠腭裂的发生可能与组蛋白H4乙酰化修饰有关。GD13.5～GD15.5腭突组织中组蛋白H4乙酰化水平显著升高可能是TCDD致胎鼠腭发育障碍的表观遗传机制之一。 第二部分 TCDD诱导胎鼠腭裂过程中TβRs基因变化的实验研究 目的：探讨TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ基因变化与TCDD所致胎鼠腭发育障碍的相关性。 方法：取24只C57BL/6J孕鼠随机分为TCDD组和对照组，每组再根据怀孕天数分成三个亚组，每组4只孕鼠。同样一次性在GD10.5分别灌胃20μg/kg TCDD（TCDD组）和等量玉米油（对照组）。在GD13.5、GD14.5和GD15.5分别剖腹孕鼠取各组胎鼠腭组织，提取总RNA，逆转录成cDNA，利用Q-PCR技术检测各组胎鼠腭组织中TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA表达变化情况。 结果：TCDD组12只孕鼠活胎数为82只，活胎发生腭裂为100%；对照组12只孕鼠获得98只活胎，无腭裂畸形发生。对照组TβR-ⅠmRNA相对表达量在GD13.5、GD14.5和GD15.5分别为2.06±0.21、1.38±0.12和0.78±0.17，TCDD组分别为0.98±0.26、0.75±0.14和1.22±0.05；对照组TβR-ⅡmRNA相对表达量在GD13.5～GD15.5分别为1.84±0.08、1.14±0.09、0.81±0.13，TCDD组分别为0.91±0.22、0.96±0.06、1.30±0.13；TβR-Ⅲ mRNA在对照组的相对表达量各自为1.86±0.10、1.11±0.11、0.67±0.15，在TCDD组分别为0.85±0.05、0.93±0.09、1.17±0.16。TCDD组的 TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及 TβR-Ⅲ mRNA在GD13.5和 GD14.5相对表达量均低于对照组，差异有统计学意义（p＜0.05）；而在GD15.5，TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-ⅢmRNA高于对照组，差异有统计学意义（p<0.05）。 结论：TCDD诱导的胎鼠在腭发育关键时期GD13.5与GD14.4， TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-ⅢmRNA呈低表达状态，而在GD15.5呈高表达。TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及 TβR-Ⅲ mRNA的低表达很可能参与了环境因素诱发胎鼠腭裂融合障碍过程。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

参考文献

第一部分 TCDD诱导胎鼠腭裂过程中组蛋白H4乙酰化的表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第二部分 TCDD诱导胎鼠腭裂过程中TβRs基因变化的实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

全文总结

文献综述:先天性腭裂发生机制中表观遗传学的作用

致谢

硕士期间发表的学术论文