EGCG预防老年小鼠心脏肌钙蛋白I表达下降及其机制研究

摘要

目的： 舒张功能障碍在老年人群中较常见，课题组前期研究发现老年小鼠心脏舒张功能障碍与心肌肌钙蛋白 I(cardiac troponin I, cTnI)表达降低密切相关，表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)能够抑制HDAC1，上调基因启动子区乙酰化水平，从而逆转cTnI表达，改善老年小鼠舒张功能障碍。一级预防是在疾病发生前针对病因采取的预防措施，可以减轻患者痛苦、家庭及社会负担。因此本研究从一级预防角度出发，择机通过饮水模拟人体口服药物途径，观察EGCG能否预防老年小鼠心脏中cTnI表达下降，并研究其内在作用机理。 方法： （1）3、12、14、16和18月龄 C57小鼠利用 RT-PCR和Western blot检测心脏中cTnI mRNA和蛋白表达。（2）12月龄C57小鼠随机分为空白组、EGCG低剂量组[EGCG-L,50 mg/(kg·d)]、EGCG中剂量组[EGCG-M,100 mg/(kg·d)]和 EGCG高剂量组[EGCG-H,200 mg/(kg·d)]，EGCG干预6个月至18月龄，3月龄小鼠为青年组对照。利用RT-PCR检测cTnI、ANP、BNP、HDAC1、HDAC2和HDAC3 mRNA表达， Western blot检测cTnI蛋白表达，CHIP-Q-PCR检测cTnI启动子区H3K9乙酰化水平和HDAC1、HDAC2、HDAC3结合水平。(3)原代心肌细胞分为空白组、DMSO组、空载体组、过表达组和过表达+EGCG组，RT-PCR检测HDAC1和cTnI mRNA表达，Western blot检测HDAC1和cTnI蛋白表达，CHIP-Q-PCR检测cTnI启动子区H3K9乙酰化水平和HDAC1结合水平，免疫共沉淀法检测HDAC1酶活性。 结果： （1）衰老过程中，与3月龄比较，心脏中cTnI mRNA和蛋白表达于16月龄开始下降（p<0.05）。（2）动物实验中，与青年组比较，空白组cTnI表达和启动子区H3K9乙酰化水平降低（p<0.05），ANP和BNP mRNA、HDAC1 mRNA和在cTnI启动子区结合水平均增加（均p<0.05）；但EGCG的三个剂量组中，ANP和BNP mRNA、HDAC1 mRNA和结合水平均低于空白组（均p<0.05）；HDAC2、HDAC3 mRNA和结合水平与空白组无差异（p>0.05）；cTnI表达和H3K9乙酰化水平与EGCG呈剂量依赖性， EGCG-H组中 cTnI表达和 H3K9乙酰化水平达到与青年组相当水平（p>0.05）。（3）细胞实验中，过表达组 HDAC1 mRNA和蛋白表达明显高于空白组、DMSO组和空载体组（p<0.05），但与过表达+EGCG组比较无差异（p>0.05）；过表达组中，HDAC1在cTnI启动子区结合水平和酶活性均高于过表达+EGCG组、DMSO组、空载体组和空白组（p<0.05）， cTnI表达和启动子区H3K9乙酰化水平低于其他四组（均p<0.05）。 结论： 高剂量200 mg/(kg·d)的EGCG可预防老年小鼠心脏cTnI表达下降，其作用机制可能与EGCG抑制HDAC1及其在cTnI启动子区结合，升高H3K9乙酰化有关。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 EGCG预防老年小鼠心脏肌钙蛋白I表达下降

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第二部分 EGCG调节心脏肌钙蛋白I表达的作用机制研究

1.材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

全文总结

创新性及意义

局限性

展望

参考文献

文献综述:EGCG对心血管系统保护作用

致谢

攻读硕士学位期间的科研情况介绍