AC142119.1调控MYCN启动子区组蛋白甲基化促进神经母细胞瘤增殖的机制研究

摘要

目的：神经母细胞瘤（NB）MYCN扩增与其快速进展密切相关，但促发MYCN扩增机制尚未完全明确。本文以与MYCN位置邻近的长链非编码基因（Long noncoding RNA, LncRNA）为切入点，从细胞生物学功能角度明确AC142119.1对NB细胞生长、增殖等的影响；从分子机制水平初步探索AC142119.1调控MYCN启动子区组蛋白甲基化的具体分子机制。 方法：借助 LncRNA表达谱芯片检测 MYCN扩增和非扩增 NB细胞系中差异表达LncRNAs，Real-time PCR和Western blot检测NB细胞系中 AC142119.1与 MYCN的表达，沉默和过表达 AC142119.1后Real-time PCR和Western blot分析AC142119.1与MYCN的表达变化；CCK-8、ki-67免疫荧光、细胞周期实验检测AC142119.1对NB细胞增殖的影响；FISH和胞质胞核分离实验对 AC142119.1进行定位， catRAPID网站预测 AC142119.1与组蛋白甲基化转移酶结合能力， ChIP-PCR检测AC142119.1对 MYCN启动子区域组蛋白甲基化的调控作用。 结果：根据基因芯片结果和生物信息学分析找到与 MYCN位置邻近差异倍数最大的LncRNA-AC142119.1，AC142119.1在MYCN高表达NB细胞系中的表达水平显著高于MYCN低表达的NB细胞系，沉默和过表达 AC142119.1后分别导致 MYCN的表达下降和增加；CCK-8、ki-67实验表明AC142119.1可以促进细胞增殖，细胞周期实验证明AC142119.1可以减少细胞S期阻滞；FISH与胞质胞核实验结果均表明 AC142119.1定位于细胞核；catRAPID结果表明 AC142119.1可能与组蛋白甲基化转移酶结合，CHIP-PCR证实沉默AC142119.1可以减少MYCN启动子区组蛋白3赖氨酸27甲基化（H3K27me3）活性。 结论：与MYCN位置邻近的LncRNA-AC142119.1在MYCN高表达的NB细胞中高表达，并促进NB细胞增殖，同时AC142119.1可以调控MYCN表达，其机制可能与调控MYCN启动子区域组蛋白甲基化有关。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 基因芯片筛选出与MYCN相关的LncRNA-AC142119.1并进行验证

1材料与方法

2结果

3 讨论

第二部分 AC142119.1促进神经母细胞瘤细胞增殖

1材料与方法

2结果

3讨论

第三部分 AC142119.1调控MYCN表达分子机制的初步研究

1材料与方法

2结果

3讨论

全文总结

参考文献

文献综述:神经母细胞瘤中长链非编码RNA的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文及参加的重要学术会议