非小细胞肺癌细胞中沉默PRR11基因抑制细胞增殖并诱发自噬的分子机理

摘要

PRR11是前期研究中发现的一个与肺癌等恶性肿瘤发生发展密切相关的肿瘤新基因，它在细胞周期调控中起关键作用，然而牵涉的具体分子机理尚不清楚。我们的研究发现，在两个非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系（H1299和A549）中，采用瞬时转染siRNA方法沉默PRR11基因表达能抑制细胞增殖并诱发自噬。CCK-8、克隆形成、BrdU标记及免疫印迹实验结果表明沉默PRR11基因表达后抑制细胞增殖并显著降低细胞周期相关蛋白的表达。同时，免疫印迹检测结果显示沉默PRR11表达导致LC-I裂解为LC3-Ⅱ，并上调自噬相关基因 ATG5和Beclin1等表达；电镜及mRFP-GFP-LC3检测结果显示沉默PRR11表达诱发自噬；而沉默ATG5表达进一步增强沉默PRR11诱发的细胞增殖抑制。另外，免疫印迹的结果表明沉默PRR11表达抑制Akt-mTOR信号通路。这些结果表明NSCLC细胞中沉默PRR11表达抑制细胞增殖并诱发保护性自噬，且肺癌细胞中PRR11高表达可能通过Akt-mTOR信号通路调节细胞增殖及自噬促进肿瘤发生发展。这些研究结果有助于进一步探索PRR11在肺癌等恶性肿瘤发生发展的作用机理。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料与方法

1.1 细胞培养

1.2 小干扰RNA介导的基因敲除

1.3 RNA的提取和定量PCR分析

1.4 细胞活性检测

1.5 抗体和试剂

1.6 间接免疫荧光染色

1.7 免疫印迹分析

1.8 透射电子显微镜

1.9 统计分析

2 结果

2.1 沉默PRR11基因表达抑制NSCLC细胞增殖

2.2 NSCLC细胞系中沉默PRR11基因表达诱发自噬

2.3 NSCLC细胞系中沉默PRR11基因表达促进自噬流形成

2.4 NSCLC细胞系中沉默PRR11基因表达抑制细胞增殖而诱发保护性自噬

2.5 NSCLC细胞系中PRR11通过Akt-mTOR信号通路调节细胞自噬

3 讨论

参考文献

文献综述:非小细胞肺癌：一组异质性疾病

致谢

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