一种新的促进体外培养肝细胞活性及增殖的方法

摘要

体外肝细胞培养是生物制药和人工肝支持系统的技术基础。体外培养肝细胞的活性低、增殖能力差一直是制约其发展的瓶颈问题，怎样提高肝细胞活性及增殖能力是目前研究的热点。本课题将中药黄芪（AM）、当归（AN）与体外肝细胞培养相结合，研究其对肝细胞形态及生理功能的影响，目前这方面的研究少见报道。并且首次以血清药理学方法研究了两者的不同比例对肝细胞的形态及生理功能的影响，为进一步提高体外培养肝细胞活性及得率提供实验依据，以及为临床肝病治疗提供新的药物。 研究含药血清对细胞形态及生理功能的影响：分别给日本大耳白兔灌胃AM、AN以及不同比例的AMAN合剂，制备对照血清及含药血清，以制备的血清培养被H2O2氧化的L02细胞，以全自动生化检测仪测定Alb及ALT含量，以3H-TdR掺入法和MTT法测定L02细胞增殖情况，透射电镜观察细胞微结构的变化，得到以下结论：(1) AM与AN比例为3：1时Alb分泌明显增加(P<0.01)、ALT含量明显降低(P<0.01)。结果提示AM与AN比例为3：1时促进L02细胞分泌功能，提高细胞膜稳定性；(2) 透射电镜观察：AM与AN比例为3：1组细胞器丰富,以粗面内质网和线粒体为主，少见凋亡小体，是促进L02细胞的分泌功能及抑制凋亡的形态学基础。(3) AM与AN比例为3：1组OD值与CPM值明显增加(P<0.05)，提示AM与AN比例为3：1时L02细胞的增殖能力明显增加。 研究AMAN对L02细胞增殖能力影响的机制：采用免疫组织化学染色(SABC法)测定AM与AN比例为3：1时对Bcl-2蛋白表达的阳性率的影响，结果显示：Bcl-2蛋白表达阳性率明显提高。提示AMAN可以通过上调Bcl-2蛋白表达抑制肝细胞的凋亡达到促进细胞增值的作用。