摘要
ABSTRACT
1 绪论
1.1 研究背景
1.1.1 埃博霉素的发现和特点
1.1.2 埃博霉素的合成方法
1.1.3 埃博霉素生物合成途径
1.1.4 埃博霉素的临床进展
1.1.5 纤维堆囊菌的研究进展
1.1.6 小结
1.2 研究的目标和内容
1.3 创新之处
2 埃博霉素的发酵和纯化
2.1 技术路线
2.2 主要材料
2.2.1 菌株和质粒
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要仪器设备
2.2.4 主要溶液配制
2.3 主要方法
2.3.1 菌种的保存和复苏
2.3.2 固体培养基的选择
2.3.3 优化发酵条件
2.3.4 埃博霉素的检测方法
2.3.5 分离和纯化
2.4 结果与分析
2.4.1 菌种的保存和复苏
2.4.2 固体培养基的选择
2.4.3 建立埃博霉素的检测体系
2.4.4 发酵条件的优化
2.4.5 分离和纯化
3 建立纤维堆囊菌的转化体系
3.1 技术路线
3.2 主要材料
3.2.1 菌株和质粒
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要仪器设备
3.2.4 主要溶液配制
3.3 主要方法
3.3.1 基因组DNA 制备
3.3.2 纤维堆囊菌So ce90 的抗性实验
3.3.3 pRP-GFP 载体构建
3.3.4 接合转移
3.3.5 转化子的荧光检测
3.3.6 转化子的PCR 检测
3.3.7 Southern 杂交分析
3.3.8 转化子的稳定性
3.3.9 结合转移的效率
3.4 结果与分析
3.4.1 纤维堆囊菌基因组DNA 提取
3.4.2 纤维堆囊菌So ce90 的抗性实验
3.4.3 pRP-GFP 的构建
3.4.4 转化菌株的荧光显微观察
3.4.5 转化菌株的PCR 鉴定
3.4.6 Southern 杂交分析
3.4.7 转化子的稳定性
3.4.8 结合转移的效率
3.4.9 EpoPro 的启动活性分析
3.4.10 pBBR1MCS 对纤维堆囊菌So ce90 的转化实验
4 讨论
4.1 埃博霉素发酵、纯化中存在的问题
4.1.1 严格控制发酵时间
4.1.2 树脂XAD-16 的利弊
4.1.3 盐离子的监控
4.2 纤维堆囊菌的结合转移策略
4.2.1 质粒pRK415 的特点
4.2.2 GFP 基因引入
4.2.3 EpoPro 片段的引入
4.2.4 载体pRP-GFP 应用前景
5 结论与展望
致谢
参考文献
附录:博士期间论文发表情况
重庆大学;