PPARγ激动剂对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

摘要

背景：研究表明，内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)存在于成人机体的骨髓和外周血中，并参与缺血组织的新生血管形成。外周血EPCs移植后心肌梗死区域新生血管形成增多，利于挽救梗死区存活心肌，改善心室功能，对于改善心肌梗死的预后有诸多方面的益处。但外周血EPCs数量有限，限制了其临床应用，因此有必要对EPCs进行体外扩增。 PPARγ激动剂能改善内皮功能，对心血管发挥有益作用，这些益处远超出其胰岛素增敏作用，因已有研究表明EPCs与内皮功能密切相关，故我们猜测其中的可能机制之一就是通过增加EPCs的数量并改善其功能进而对心血管发挥有益作用。 本研究利用PPARγ激动剂赛格列酮(Ciglitazone)干预体外培养的外周血EPCs，观察赛格列酮对体外培养的外周血EPCs数量和粘附、迁移与增殖功能的影响，构建外周血EPCs体外扩增的方法，并探讨PPARγ激动剂对心血管发挥有益作用的可能机制之一。 方法： (1)采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，将其接种在包被有纤维连接蛋白的培养板用条件培养液培养7天，收集贴壁细胞，加入不同浓度的赛格列酮(分别为0.01、0.1、1.0、10μmol/l)培养24小时以观察量效关系，其中1.0μmol/l分别培养6、12、24、48小时以观察时效关系。 (2)EPCs的鉴定采用激光共聚焦显微镜观察DiI-acLDL和FITC-UEA-I双染色阳性细胞为正在分化的EPCs。 (3)利用细胞黏附能力测定评价外周血EPCs的黏附能力。 (4)利用改良Boyden小室测定外周血EPCs的迁移能力。 (5)利用MTT比色试验评价外周血EPCs的增殖能力。 结果： (1)EPCs的鉴定：分离获得的外周血单个细胞培养7天后呈梭形的内皮样细胞，用DiI-acLDL和FITC-UEA-I对细胞进行染色，经激光共聚焦显微镜鉴定，(89±6.2)％的贴壁细胞呈双染色阳性。 (2)不同浓度的赛格列酮干预EPCs24小时后增加EPCs的数量，对照组、0.01μmol/l、0.1μmol/l、1.0μmol/l、10μmol/l赛格列酮组的EPCs的数量分别为41±4、50±5、99±9、113±6、77±10，0.01μmol/l组与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)，0.1μmol/l组开始有统计学意义(P＜0.05)，在一定浓度范围内随浓度增加而增加，1.0μmol/l达最大效应，当浓度过高时EPCs的数量有所下降，但仍高于对照组。1.0μmol/l赛格列酮干预EPCs0、6、12、24、48小时后EPCs的数量分别为33±3、42±4、92±7、113±6、76±7，与0小时比较，6小时组无统计学意义(P＞0.05)，12小时组开始有统计学意义(P＜0.05)，24小时达高峰，较对照组增加近一倍，48小时后有所下降，但仍高于对照组。 (3)不同浓度的赛格列酮干预EPCs24小时后增强EPCs的黏附能力，对照组、0.01μmol/l、0.1μmol/l、1.0μmol/l、10μmol/l赛格列酮组的EPCs的数量分别为10±5、11±4、25±4、31±4、18±3，0.01μmol/l组与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)，0.1μmol/l组开始有统计学意义(P＜0.05)，在一定浓度范围内黏附能力随浓度增加而增强，1.0μmol/l达最大效应，当浓度过高时EPCs的黏附能力有所下降，但仍强于对照组。1.0μmol/l赛格列酮干预EPCs0、6、12、24、48小时后EPCs的数量分别为8±3、9±3、20±6、31±4、23±5，与0小时比较，6小时组无统计学意义(P＞0.05)，12小时组开始有统计学意义(P＜0.05)，24小时达高峰，48小时后略有下降，但仍强于对照组。 (4)不同浓度的赛格列酮干预EPCs24小时后增强EPCs的迁移能力，对照组、0.01μmol/l、0.1μmol/l、1.0μmol/l、10μmol/l赛格列酮组的EPCs的数量分别为9±5、12±5、41±4、46±4、32±3，0.01μmol/l组与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)，0.1μmol/l组开始有统计学意义(P＜0.05)，在一定浓度范围内迁移能力随浓度增加而增强，1.0μmol/l达最大效应，当浓度过高时EPCs的迁移能力有所下降，但仍强于对照组。1.0μmol/l赛格列酮干预EPCs0、6、12、24、48小时后EPCs的数量分别为7±3、10±4、19±5、45±4、33±5，与0小时比较，6小时组无统计学意义(P＞0.05)，12小时组开始有统计学意义(P＜0.05)，24小时达高峰，48小时后略有下降，但仍强于对照组。 (5)不同浓度的赛格列酮干预EPCs24小时后增强EPCs的增殖能力，对照组、0.01μmol/l、0.1μmol/l、1.0μmol/l、10μmol/l赛格列酮组的EPCs的MTT值分别为0.47±0.07、0.57±0.05、0.73±0.05、0.86±0.07、0.72±0.05，0.01μmol/l组与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)，0.1μmol/l组开始有统计学意义(P＜0.05)，在一定浓度范围内增殖能力随浓度增加而增强，1.0μmol/l达最大效应，当浓度过高时EPCs的迁移能力有所下降，但仍强于对照组。1.0μmol/l赛格列酮干预EPCs0、6、12、24、48小时后EPCs的MTT值分别为0.45±0.04、0.56±0.03、0.68±0.06、0.86±0.07、0.71±0.07，与0小时比较，6小时组无统计学意义(P＞0.05)，12小时组开始有统计学意义(P＜0.05)，24小时达高峰，48小时后略有下降，但仍强于对照组。 结论：PPARγ激动剂赛格列酮能增加外周血内皮祖细胞的数量，并改善其粘附、迁移与增殖功能。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述内皮祖细胞对心血管疾病的潜在治疗价值

致谢