人结肠癌LoVo细胞系经草酸铂或伊立替康处理后的蛋白质组学分析

摘要

第一部分：
　　 目的：分析草酸铂处理后人结肠癌LoVo细胞系的差异表达蛋白，从蛋白质组学角度探讨草酸铂对人结肠癌LoVo细胞系的作用机制。
　　 方法：按照MTT法进行细胞增殖的检测，计算草酸铂半数抑制浓度。用100ml含半数抑制浓度草酸铂的培养基作用于LoVo细胞系后于24h后收集细胞为实验组，用不含药物的培养基作用LoVo细胞系后于24h后收集细胞为对照组。经水化、等电聚焦、平衡、垂直凝胶电泳对两组总蛋白进行分离，然后进行考马斯亮蓝染色，扫描获得双向凝胶电泳图谱。分析凝胶图像，寻找两组差异表达蛋白质。质谱鉴定差异蛋白质，并进行生物信息学分析。
　　 结果：实验组与对照组蛋白质斑点数为1013和1021。平均匹配点实验组为812个，对照组829个。选取其中差异最显著的10个点进行MALDI-TOF-MS分析，成功鉴定出9个蛋白质。它们分别为实验组表达下调的蛋白：A1号60S核糖体蛋白质，A2、A4号3磷酸甘油醛脱氢酶，A3号醛酮还原酶1-C2，A5号鸟苷酸结合蛋白样1，A6号核苷二磷酸激酶B；实验组表达上调的蛋白：B7号2微球蛋白，B8号Pre-mRNA剪接因子，B9号不均一核糖核蛋白H3，B10号尿嘧啶糖苷酶。差异蛋白与DNA的损伤修复、pre-mRNA及c-myc基因转录因子PuF的转录修饰、蛋白翻译及翻译后的调控、免疫逃逸、能量代谢和诱导调亡的信号传导通路等作用机制相关。
　　 结论：草酸铂作用人结肠癌LoVo细胞系后有60S核糖体蛋白质等多种差异蛋白表达；差异蛋白质与DNA的损伤修复等作用机制相关；提示草酸铂抗癌机制可能与以上作用机制相关。
　　 第二部分：
　　 目的：分析伊立替康处理后人结肠癌LoVo细胞系的差异表达蛋白，从蛋白质组学角度探讨伊立替康对人结肠癌LoVo细胞系的作用机制。
　　 方法：按照MTT法进行药物增殖抑制的检测，计算伊立替康半数抑制浓度。用100ml含半数抑制浓度伊立替康的培养基作用于LoVo细胞系后于24h、48h和72h后收集细胞为实验B、C、D组，用不含药物的培养基作用LoVo细胞系后于24h后收集细胞为对照A组。经水化、等电聚焦、平衡、垂直凝胶电泳和硝酸银染色后获得双向凝胶电泳图谱，对其进行扫描和分析，寻找两组差异表达蛋白质。质谱鉴定差异蛋白质，并进行生物信息学分析。
　　 结果：实验组与对照组平均蛋白质斑点数为1100、1087、1097和929个，平均匹配点为965、892、920和758个。选取其中差异最显著的17个点进行MALDI-TOF-MS分析，成功鉴定出9个蛋白质。它们分别是C2号疏基过氧化物还原酶-2、B6号L-3-羟酰基辅酶A水解酶、B7号热休克蛋白27、B8号丙酮酸激酶同工酶M2、B9、A12号α烯醇化酶、A13号3-酮酸辅酶A转移酶1、B15号热休克蛋白60、B16号ATP合酶和B17号鸟苷酸结合蛋白β2样1。生物信息学分析查询显示，差异蛋白与抗氧化作用、诱导凋亡的信号转导途径，分子伴侣机制及能量代谢途径相关。
　　 结论：伊立替康作用人结肠癌LoVo细胞系后有疏基过氧化物还原酶-2等多种差异蛋白表达；涉及抗氧化作用等作用机制；提示伊立替康抗癌机制可能与以上作用机制相关。