肠胃清对结肠癌细胞草酸铂药代动力学的影响

摘要

目的：研究肠胃清逆转人结肠癌耐草酸铂细胞(HCT116／L-OHP)的耐草酸铂(oxaliplatin，L-OHP)作用，并从药代动力学角度探讨其逆转耐药作用与细胞内铂(platinum，Pt)药物含量、细胞摄入、排出草酸铂以及铜转运蛋白等的关系。方法：以四甲基偶氮唑盐比色法确定人结肠癌耐药细胞株耐药性，明确药物血清对HCT116／L-OHP耐L-OHP的逆转作用;通过原子吸收分光光度法测定细胞中Pt药物的浓度与人结肠癌细胞耐药性关系，并检测药物血清对细胞内Pt药物含量以及细胞对L-OHP摄入、排出的影响;采用蛋白质印迹法检测铜转运相关蛋白人铜转运蛋白1(human copper transporter 1，hCTR1)、铜转运蛋白α链(ATPase Cu2+ transporting alpha polypeptide，ATP7A)、P型铜转运ATP酶(copper-transporting P-type adenosinetriphosphatase，ATP7B)、谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione-S-transferase-π，GST-π)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associatedprotein 2，MRP2)。结果：7.5％药物血清联合L-OHP对HCT116／L-OHP的作用后，HCT116／L-OHP对L-OHP的敏感性增加，IC50由89 μg／mL下降到32.45μg／mL，逆转指数达到2.74。HCT116／L-OHP细胞内铂含量比HCT116细胞株降低;HCT116和HCT116／L-OHP细胞株经过7.5％中药血清联合L-OHP处理后，胞内Pt-DNA含量比单独L-OHP处理细胞增加。肠胃清药物血清可剂量依赖性增加人结肠癌细胞HCT116及HCT116／L-OHP对L-OHP的吸收，同时抑制其排出。中药血清联合L-OHP处理后HCT116／L-OHP细胞中ATP7A、ATP7B表达量相对于单独L-OHP处理组减少，hCTR1蛋白表达增多，但对GST-π、MRP2蛋白的表达无明显影响。结论：肠胃清通过上调hCTR1蛋白，下调ATP7A、ATP7B蛋白表达，促进HCT116和HCT116／L-OHP细胞对L-OHP的摄入，抑制其对L-OHP的排出，增加细胞内Pt-DNA加合物含量，从而逆转其耐药株HCT116／L-OHP细胞对草酸铂的耐药性。