阿尔茨海默病相关基因白细胞介素18(IL18)启动子区多态性对其转录活性的影响

摘要

【研究背景】阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种主要在老年期发生的以进行性痴呆为主要特征的神经元退行性疾病。AD的病因尚未明确，众多研究表明其与脑内慢性炎症反应相关。IL18作为一种炎症细胞因子，近年越来越多被证实与AD发病相关。IL18基因调控区存在-607C/A（RS1946518）、-137G/C（RS187238）等 SNPs，已有文献报道多态性与老年性痴呆发病间的关系，但未见这两处基因多态性对IL18基因转录活性影响的报道。
　　【研究目的】本课题通过分子生物学技术，建立IL18-607C/A、IL18-137G/C野生型和突变等位基因的PGL4.10重组试验质粒，在细胞水平研究-607C/A突变、-137G/C突变对IL18基因转录调控的影响。
　　【方法】选取双荧光报告基因系统(pGL4.10（luc2) Basic及 pRL-TK)作为报告基因载体，用基因重组和定点突变技术构建含不同SNP型的IL18启动子报告基因质粒，转染人胚胎肾细胞系293细胞（HEK293)，计算不同SNP各启动子的相对荧光素酶活性（relative luciferase activity，RLA)
　　【结果】所构建的各 SNP型质粒均具有明确的启动子活性；突变质粒-607A/-137C、-607C/-137G及-607C/-137C与野生质粒-607A/-137G相比，转录活性均有显著性差异，（P<0.01）；而单位点突变质粒-607A/-137C、-607C/-137G与两位点突变质粒-607C/-137C转录活性相比均无差异性(P>0.05)。
　　【结论】-607、-137位点碱基的突变均可影响IL18基因的转录，-607A/-137C、-607C/-137G及-607C/-137C均上调了IL18基因的转录活性，致IL18蛋白表达水平增加，促进神经炎症的病理过程，可能导致AD的发生。

目录

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缩略词表

第1章前言

第2章实验材料

2.1 血样、菌株、细胞株及载体

2.2 试剂与配液

2.3 实验设备

第3章实验方法

3.1 IL18基因启动子区目的片断扩增

3.2构建pGEMT－IL18质粒

3.3 上述连接产物转化TOP10感受态细胞

3.4构建PGL 4.10－IL18质粒

3.5构建PGL 4.10－IL18突变质粒

3.6 细胞培养及转染

3.7 细胞瞬时转染(96孔板)

3.8 转录活性分析

第4章结果

4.1 成功克隆目的片段（966bp）

4.2报告基因质粒的建立

4.3 HEK293细胞培养

4.4不同SNP型IL18启动子转录效率的比较

第5章讨论

5.1 IL18是阿尔茨海默病发病的相关基因之一

5.2 IL18 启动子分析

5.3 单一位点突变质粒－607A/-137C及-607C/-137G

5.4 两位点同时突变质粒－607C/-137C

第6章结论

参考文献

综述