基层医院铜绿假单胞菌耐药现况的调查与研究

摘要

【目的】：
　　了解基层医院铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）的耐药情况，明确铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的种类，分析其对耐药性的影响,探讨耐药菌外膜孔蛋白OprD2基因缺失及β-内酰胺酶耐药基因的携带在Pa耐β-内酰胺类抗生素中的作用，探讨分析铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制。为预防和控制耐药菌株在基层医院的出现和传播、指导基层医院临床合理应用抗生素提供实验室依据。
　　【方法】：
　　1.铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性测定：采用法国梅里埃生物公司的VITEK-2全自动微生物鉴定及药敏分析仪测定90株临床分离株对15种抗生素的敏感性。
　　2.铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的检测:
　　(1)采用改良三维试验测定超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）。
　　(2)采用IMP-EDTA纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶（MBLs）。
　　3.采用聚合酶链反应（PCR）技术对产酶菌常见的18种β-内酰胺酶及外膜蛋白OprD2基因基因扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,阳性产物再进行测序分析。
　　【结果】：
　　1.90株铜绿假单胞菌对15种抗生素的药敏结果：敏感性较高的6种抗生素依次为阿米卡星、美罗培南、头孢吡肟、左氧氟沙星、亚胺培南、头孢他啶，其敏感率分别为75.5％、71.1%、70.0%、67.8%、66.7%、65.6%。对铜绿假单胞菌耐药率较高的抗生素依次是呋喃妥因、头孢曲松、头孢噻肟、哌拉西林，其耐药率分别为95.6%、83.4%、67.8%、48.9%。
　　2.90株铜绿假单胞菌中,β-内酰胺酶产酶率为27.8%(25/90)。25株产酶菌中，产金属β-内酰胺酶的菌株9株，占36.0%（9/25）；产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的菌株7株，占28.0%(7/25)；产AmpC酶的的菌株6(6/25)株，占24.0%；同时产ESBLs和AmpC酶的菌株3株，占12.0%(3/25)。
　　3.产酶菌株药敏试验结果显示，除呋喃妥因外，对其他抗生素耐药率，产酶菌明显高于非产酶菌（P<0.05），产酶菌株对β-内酰胺类抗生素耐药严重，且同时存在对喹诺酮类、氨基糖苷类等抗生素耐药（多重耐药）。检出多重耐药铜绿假单胞菌（MDRPA）31株，占34.4%。这些菌株主要分布在痰标本中，占51.7%。ICU和呼吸内科铜绿假单胞菌检出率较高，分别为40.0%和26.7%。ICU中MDRPA株检出率最高，为54.8%。
　　4．25株产酶菌 PCR结果显示：β-内酰胺酶基因 OXA-10阳性的有7株，占28.0%(7/25)，VIM-2阳性的有3株，占12.0%（3/25），16个菌株OprD2基因缺失，占64.0%（16/25），其余基因均未检出。
　　【结论】：
　　1.基层医院铜绿假单胞菌的耐药现状较严重，出现多重耐药菌株且分布较广泛。
　　2．基层医院铜绿假单胞菌中有近三分一的菌株产生β-内酰胺酶，产酶菌耐药率明显高于非产酶菌，产酶菌株对β-内酰胺类抗生素耐药严重，且同时存在对喹诺酮类、氨基糖苷类等抗生素耐药（多重耐药），β-内酰胺酶产生是导致铜绿假单胞菌耐药的重要机制之一。
　　3．铜绿假单胞菌中OXA-10、VIM-2基因的存在及OprD2基因缺失可能是该菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要机制之一。

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第一部分 前 言

第二部分 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 方法

第三部分 结 果

3.1铜绿假单胞菌在临床标本的分布：

3.2铜绿假单胞菌在临床科室的分布：

3.3 药敏试验结果

3.4 铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检测结果及其与耐药性关系

3.4 PCR 检测结果

第四部分 讨 论

第五部分 结论

参考文献

综述

攻读学位期间的研究成果

致谢

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