不明原因复发性流产患者分泌中期子宫内膜VEGF和PR的表达

摘要

背景:
　　复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）是最常见的妊娠并发症之一，发病率为0.5％-2.0%。引起RSA的病因有染色体异常、生殖道解剖学异常、内分泌异常、感染因素、自身免疫异常、环境因素等。但是仍有50%的RSA原因不明。近年来研究发现不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)与母-胎界面免疫耐受异常、遗传性易栓症、基因多态性等相关。URSA的病因非常复杂，可能为单因素或多因素，其确切病理机制尚不明了。因此多方向研究为阐明URSA系统的病理机制打下基础。
　　子宫内膜受到蜕膜化变应原的刺激发生蜕膜化。蜕膜对胚胎的着床、妊娠的建立与维持，以及分娩的发动均起着极为重要的作用。子宫内膜蜕膜化包括子宫腺体的内分泌改变、基质细胞的分化、子宫自然杀伤细胞巨噬细胞的积聚及血管的再生。子宫内膜通过蜕膜化反应抑制炎症因子的产生和氧化应激反应，从而保护妊娠。子宫内膜基质细胞（endometrium stromal cell,ESC）的分化是由孕酮诱导的，在分泌中晚期受蜕膜化诱导因子刺激，分化成蜕膜。ESC含有携带cAMP的孕酮和E2，蜕膜的分化是靠孕酮和cAMP信号路径共同完成的。孕酮主要是通过靶细胞PR受体(progesterone receptor,PR)结合，激活转录因子，使子宫内膜基质细胞在分泌期发生蜕膜化。PR调控蜕膜化的作用机理不是很明了，现有的研究证据表明，子宫内膜局部因子和cAMP第二信使途径的激活，诱导转录因子（这些因子包括FOXO1、STAT5、C/EBPb）的表达或激活，来调节PR的功能。因此PR在子宫内膜中的表达影响着内膜的蜕膜化。
　　血管的再生由血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)介导。VEGF是一种作用于血管内皮的细胞因子，与受体Flt-1、Klk-1、Flt-4结合引起受体磷酸化，进而与磷脂酶C结合，进一步激活磷脂酶C-蛋白激酶A传导通路，通过信号传导，诱导微血管形成，增加血管通透性。VEGF参与子宫内膜蜕膜化过程中的血管再生，并参与妊娠胎盘的形成及滋养叶细胞的侵袭。
　　此外，在月经周期中，分泌中期子宫内膜表达的细胞因子mRNA与妊娠期子宫内膜最为相似。研究表明早期胚胎发育异常的患者种植窗期子宫内膜细胞因子表达异常，如RSA患者种植窗期子宫内膜IL-1及IL-6表达异常。子宫内膜容受性异常可能造成胚胎最早期发育障碍，胚胎虽然可以着床，但不能继续发育，造成流产。有学者提出RSA的大部分患者存在子宫内膜容受性缺陷，但是少有研究RSA患者分泌中期子宫内膜因子的表达与流产的关系。
　　综上所述分泌中期子宫内膜的VEGF和PR的表达影响着妊娠结局。
　　目的:
　　通过检测URSA患者（研究组）和因输卵管间质部梗阻行IVF的妇女（对照组）分泌中期子宫内膜VEGF和PR的mRNA和蛋白表达水平，并比较两组人群的表达差异，初步探讨子宫内膜分泌中期VEGF、PR的表达水平与URSA的关系，为阐明URSA发病机制提供新的理论依据。
　　方法:
　　1、研究对象
　　2010年6月至2011年12月在广州医学院第三附属医院生殖医学中心和广东省妇幼保健院生殖医学中心及产前诊断科就诊的22例复发性流产患者（研究组），年龄22~34岁，平均年龄（26.94±2.75）岁，及同期20例在广州医学院第三附属医院和广东省妇幼保健院生殖医学中心因输卵管间质部梗阻行IVF的妇女（对照组），年龄24~35岁，平均年龄（28.53±3.68）岁。
　　2、实验方法
　　(1)所有内膜组织经HE染色，进行组织学分期，同时判断有无炎性细胞浸润。
　　(2)比较两组患者月经第3-5天的激素（FSH、LH、E2、PRL、T）水平，及黄体中期（排卵后6-9天）P水平。
　　(3)采用实时荧光定量PCR检测两组患者子宫内膜VEGF和PR的mRNA表达水平，比较两组患者表达水平的差异。
　　(4)采用免疫组化方法检测检测两组子宫内膜VEGF和PR的蛋白表达水平，比较两组患者表达水平差异。
　　结果:
　　1、研究组和对照组病例共42例，均显示分泌中期内膜，研究组中6例有浆细胞浸润，对照组中未发现明显炎症细胞浸润。
　　2、研究组与对照组患者的FSH（7.44±1.50 VS7.20±1.20）U/L、LH(5.70±2.64 VS5.10±2.10) U/L、E2（51.30±36.55 VS45.31±21.46）pg/ml、PRL(20.37±10.79 VS19.82±12.51)ng/ml、T(2.14±0.71 VS2.09±0.68)nmol/l、P(35.5±4.03 VS37.22±3.72)nmol/l的值比较，均无统计学差异(P>0.05)。
　　3、VEGF和PR的mRNA在42例患者子宫内膜中均有表达。但结果显示研究组VEGF的mRNA表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P=0.001）；研究组PR的mRNA表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.001）。
　　4、VEGF和PR蛋白在42例患者子内膜中均有表达。VEGF主要表达于腺上皮和腔上皮，间质有少量表达，定位于胞浆，PR主要表达于间质，在腺上皮也有少量表达，定位于细胞核。VEGF的蛋白半定量表达水平低于对照组，差异有统计学意义(P=0.037)，研究组PR的蛋白半定量表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.001）。
　　结论:
　　1、基础激素水平与URSA不相关。
　　2、研究组子宫内膜的VEGF、PR的mRNA表达水平和蛋白的半定量表达水平均低于对照组，说明URSA患者分泌中期VEGF、PR的相对低表达可能是导致URSA的分子机制之一。

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封面

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中英文缩略词对照表

中文摘要

英文摘要

前 言

资料与方法

一、研究对象与资料采集

二 实验材料与方法：

统计学方法

结 果

讨 论

一 基础激素水平与URSA的关系

二 分泌中期子宫内膜VEGF和PR与URSA的关系

结 论

参考文献

附 图

综 述

致谢

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