Dravet综合征患者SCN1A基因突变(c.1738C>T和c.3705+1G>T)体外剪接分析

摘要

【目的】
　　选取本实验室筛查出的Dravet综合征(DS)患者的SCN1A基因突变,通过生物信息学分析其对剪接影响,构建迷你基因进行体外剪接分析。
　　【研究对象和方法】
　　选取我院确诊的具有SCN1A基因突变的Dravet综合征患者,对所发现的外显子或内含子突变进行生物信息学分析,若突变能从理论上对剪接有影响,则进一步构建迷你基因进行体外剪接分析。
　　【结果】
　　SCN1A基因c.1738C>T突变体和野生型转录本一致;SCN1A基因c.3705+1G>T导致产生了两种异常转录本,一种导致18号内含子保留20bp碱基,一种导致18号外显子减少了49bp碱基。
　　【结论】
　　(1)SCN1A基因c.1738C>T突变并未能影响剪接,但c.1738C>T突变形成一个无义突变导致蛋白翻译提前终止形成截短蛋白,c.1738C>T突变可能通过无义突变导致疾病发生。
　　(2)SCN1A基因c.3705+1G>T突变很可能通过对剪接的影响从而导致疾病的发生。

目录

封面

目录

缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

研究对象和方法

一、研究对象

1. Dravet综合征患者临床诊断标准：

2. Dravet综合征患者应该具有SCN1A基因突变：

二、研究方法

1. 生物信息学分析

2. PCR扩增SCN1A第10,11,12,13;17,18,19,20号外显子及两端部分内含子，依次命名为E10,E11,E12,E13;E17,E18,E19,E20

3.构 建 野 生 型 pTARGET-EXON-10-11-12-13 和pTARGET-EXON-17-18-19-20 以及各自的突变体 c.1738C>T和c.3705+1G>T

4．野生型和突变型分别转染细胞进行体外剪接分析

结果

1. DS患者SCN1A基因 c.1738C>T和c.3705+1G>T突变患者临床资料简述

2．Dravet综合征患者SCN1A基因c.1738C>T和c.3705+1G>T生物信息学分析结果

3. pTARGET-EXON-10-11-12-13 和 pTARGET-EXON-17-18-19-20各自质粒构建路线图及各自酶切鉴定

4. DS患者SCN1A基因c.1738C>T和c.3705+1G>T 突变RT-PCR琼脂糖电泳结果

5. DS患者SCN1A基因c.1738C>T和c.3705+1G>T 突变RT-PCR产物各自测序结果及剪接示意图

讨论

1. SCN1A可能的致痫机制以及其相关因素

2. c.1738C>T和c.3705+1G>T患者临床表型差异的可能原因

3. c.1738C>T和c.3705+1G>T突变可能的致痫机制

展望

结论

参考文献

致谢

声明