CD4±树突状细胞在大鼠各级免疫器官中表型特征初查

摘要

前言
　　近些年树突状细胞在调节机体免疫功能中发挥的重要作用被广泛关注。DC是非常异质的一类细胞群,不同的亚群发挥的功能不同。因此对DC亚群的检测的是非常重要的,鉴于目前DC功能学分类趋于统一性,对于其调节免疫平衡的关键在于促进免疫反应或调节免疫耐受两方面显得尤为突出,这在克服器官移植排斥反应和调动机体抗肿瘤能力方面具有良好意义。大鼠是研究这些问题的良好哺乳类动物模型的代表,鼠DC与人类的DC存在相关性以及在大多数情况下能提供一个合适的模型。大鼠DC有相对特异性的标记物CD103,能被抗体OX62识别。诚然有部分研究揭示大鼠DC中CD103+CD4+(CD4+DC)与CD103+CD4-(CD4-DC)在调节免疫平衡的功能学上存在明显差异,但是研究结果只代表了单个器官或两个器官之间情况,不能反映其在机体各级免疫器官中的状况。因此为了全面反映这两类DC亚群在机体各级免疫器官中的功能情况,我们首先需对其在三级免疫器官中基本分布情况做一调查,为后续研究提供基础数据。
　　研究目的：
　　基于上述DC亚群在三级免疫器官中的分布情况缺乏较为系统的基础数据。这是深入研究其功能学的基础,我们打算正常大鼠作为研究对象,首先对其在稳态下的状况作一调查。拟:①、探索正常大鼠免疫系统中CD4±DC的形态、所占比例及分布状况。②、探讨各级免疫器官之间CD4±DC分布与各器官功能的潜在关系。③、为下一步研究CD4±DC在肝癌或肝移植模型的应用打下基础。
　　研究对象和方法：
　　30只正常成年大鼠(180-200g)的胸腺、脾脏、肠系膜淋巴结、空肠、回肠组织标本中应用双重免疫组织化学染色检测大鼠免疫系统中CD103+DC在组织中占比例,及免疫荧光染色检测CD4±DC的形态、所占比例及分布状况,激光共聚焦技术检测CD4±DC的形态学和分布特点。
　　研究结果：
　　免疫组化结果:
　　CD103+DC表达率分别为:胸腺(T)0.94％;脾脏(S)0.98%;肠系膜淋巴结(MLN)
　　1.29%;空肠(J)LP4.63%;回肠(IL)LP2.84%。
　　免疫荧光结果:
　　①、CD103+DC表达率分别为:胸腺(T)1.22%;脾脏(S)0.76%;肠系膜淋巴结(MLN)1.71%;空肠(J)LP8.72%;回肠(IL)LP13.62%。免疫组化与免疫荧光结果比较,在胸腺、脾脏、MLN的结果无统计学差异(P>0.05),而在空肠LP和回LP两者中,免疫组化结果小于免疫荧光结果,有统计学差异(P<0.05)。
　　②、CD4+DC表达率分别为:胸腺(T)0.33%;脾脏(S)0.35%;肠系膜淋巴结(MLN)0.19%;空肠(J)LP3.74%;回肠(IL)LP8.37%。胸腺皮质0.31%,髓质0.36%;MLN皮质0.14%,髓质0.27%。
　　③、CD4-DC表达率分别为:胸腺(T)0.86%;脾脏(S)0.38%;肠系膜淋巴结(MLN)1.33%;空肠(J)LP5.00%;回肠(IL)LP4.45%。胸腺皮质0.82%,髓质0.93%;MLN皮质0.85%,髓质2.10%。
　　④相互比较结果:CD4-DC:CD4+DC在胸腺、肠系膜淋巴结和回肠黏膜肠固有层比值分别约3:1、7:1和1:2(P<0.05),而在脾脏和空肠黏膜肠固有层中两者比例相识,无明显差异。胸腺和MLN中皮质与髓质的比较:CD4-DC在MLN中皮质与髓质为1:2.5,在胸腺中皮质与髓质为1:1;CD4+DC在MLN中皮质与髓质为1:2,胸腺中皮质与髓质为1:1。MLN中皮质CD4-DC:CD4+DC为6:1,MLN中髓质CD4-DC:CD4+DC为8:1;胸腺中皮质CD4-DC:CD4+DC为2.5:1,胸腺中皮质CD4-DC:CD4+DC为3:1。
　　激光共聚焦结果:
　　CD4-DC成巢聚集,核大、圆或椭圆,包浆少,可有足突,核浆比≥1,同源性较差,但是在MLN的TCAs和小肠LP中CD4-DC的胞浆大,核小圆居中,足突明显;在胸腺和MLN中占主要,围绕在脾脏的TCAs区。
　　CD4+DC分散,核中、圆或椭圆,包浆较多,少有足突,核浆比<1,同源性好,回肠中占主要。围绕在脾脏的红髓。
　　结论：
　　1.IF、IHC和激光共聚焦显微镜三者结合起来能够很好用于标记蛋白的定位和半定量,更好服务于我们今后进一步肝癌或肝移植实验研究。
　　2.CD103可以用来标记大鼠MDC,为今后DC的研究打下坚实的基础。
　　3.CD4-DC在免疫系统中主要起免疫耐受的作用,而CD4+DC更多起免疫应答作用。

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前言

材料和方法

一、实验材料

1.实验动物

2. 主要实验设备

3. 实验试剂

4. 试验方法

结果

1. CD103+DC表达率

1.1免疫组化结果：

1.2免疫荧光结果

2.免疫器官中CD4-CD103+DC和CD4+CD103+DC的表达率（IF）

3. 胸腺和MLN的皮质与髓质CD4-CD103+DC和CD4+CD103+DC表达情况。

4 .CD4-CD103+DC和CD4+CD103+DC的形态学特点（激光共聚焦）

讨论

1. CD103标记MDC在三级免疫器官中的分布特征及意义

2. CD4±DC在三级免疫器官中的形态分布特征及意义

结论

本研究的创新之处

存在问题和展望

参考文献

1. 综 述

致谢

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