应用RAPD技术进行菜心（Brassica campestris L.ssp.chinensis var.utilis Tsenet Lee）种质遗传多样性的研究

摘要

本文运用RAPD技术对28个菜心栽培品种和3个小白菜栽培品种进行了遗传多样性研究，将亲缘关系较近的品种聚在一起，为进行菜心的相关研究提供新的理论依据。取得的主要结果如下： 1.基因组DNA的提取进行RAPD反应的前提是获得完整足量的基因组DNA。根据菜心组织中富含多糖等物质的特性，用改良的CTAB法(CTAB浓度为2％，EDTA浓度为15mmol/L)提取到适用于RAPD扩增反应的基因组DNA。用紫外分光光度法检测出该法提取的DNA其OD260与OD280的比值在1.8左右，OD260与OD230的比值在2.0左右，产量均大于160μg/g，琼脂糖凝胶电泳也呈现出单一、明亮的条带。 2.RAPD反应体系的建立RAPD带谱对实验程序和条件的变化很敏感，因而使RAPD实验条件标准化就非常重要。对影响RAPD扩增反应的诸多因子逐一进行优化，最终建立了一套适合菜心的RAPD反应体系：在25μL的反应体系中含有0.8U的Taq酶，0.28μmol/Lprimer，30ng的DNA，2.0mmol/LMg2+，0.20mmol/LdNTPs。PCR反应参数为94℃5min；94℃1min，36℃1min，72℃2min，37个循环；72℃延伸10min。 3.多态性引物的筛选以6个具有代表性的栽培品种为材料，从80个引物中筛选出9个能扩增出多态性条带的引物(S2、S18、S27、S29、S30、S40、S54、S57、S61)。它们共扩增出49条稳定的条带，多态性条带数为22条，占扩增总片段数的44.9％，呈现出丰富的多态性。 4.菜心遗传多样性分析用筛选出的9个引物对DNA样品进行扩增反应，得到了清晰的RAPD扩增图谱，并对扩增结果进行了聚类分析。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

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第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章讨论

第五章结论

参考文献

附录

致谢