假单胞菌20-5菌株对烟草黑胫病的生物防治研究

摘要

烟草黑胫病(Tobacco Black Shank)是一种由烟草黑胫病菌[Phytophthora parasitica var． nicotianae(Breda de Hean)Tuker]引起的烟草病害，破坏性极强，对所有栽培烟草具有世界范围内的毁灭性危害，其防治十分困难。目前，人们主要是用化学农药来防治该病。然而，由于具有环境污染严重、残留药物对人畜危害大、容易诱导产生病虫害的耐药性等问题，传统的化学农药已经受到严重的质疑和挑战。与之相比，生物农药具有对哺乳动物毒性低、对环境压力小等优点。因此，生物农药的研制与开发具有很大价值和潜力。 在研究烟草黑胫病生防菌的过程中，我们从土壤中分离得到一株产多种抗生素的假单胞菌Pseudomonas sp．，编号为20<'＃>-5，初步研究表明其对烟草黑胫病菌有较强的抑制作用。本论文在此基础上，对目标菌株20<'＃>-5抑制烟草黑胫病菌的平板拮抗作用、防治烟草黑胫病的温室控病试验、田间防效试验及其定殖规律进行了系统的研究。结果如下： 1．平板拮抗试验分别用20<'＃>-5菌及其发酵液内的活性物质对烟草黑胫病菌进行了平板拮抗试验。结果表明，20<'＃>-5菌明显抑制了黑胫病菌的生长，对峙培养60h后，抑菌带宽达到0.5cm；镜检受抑制的黑胫病菌菌丝，发现菌丝生长畸形，菌丝壁消解。20<'＃>-5菌发酵液内的活性物质(以下简称20<'＃>-5菌发酵液)对黑胫病菌菌丝的生长也有抑制作用，活性物质浓度越高，抑制率越强。 2．温室控病试验采用20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病进行盆钵控病研究。20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病发病前的处理和发病后的处理均有一定的防治效果，分别达到59.32％和10.17％，前者防效明显高于后者。温室盆栽试验表明，20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病的预防效果远远好于治疗效果，这为田间防治提供了重要信息。 3．田间防效试验发病初期，20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病发病前的处理防效为64.39％，低于20％移栽灵防治效果的72.07％；高于58％甲霜灵一锰锌(防效为44.88％)；发病后的处理防效仅为39.88％。统计结果显示，各药剂处理的防效之间差异不显著。 发病盛期，20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病发病前的处理防效有所上升，达到75.68％，高于发病后的处理(防效为50.00％)、58％甲霜灵．锰锌(防效为36.58％)和20％移栽灵(防效为29.77％)，但其与前二者差异不显著，与后者差异显著。两个化学药剂处理的防效均有下降趋势。 发病末期，20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病发病前的处理防效仍在上升，达79.70％，显著高于58％甲霜灵.锰锌(防效为37.84％)和20％移栽灵(防效为29.16％)；也高于发病后的处理(防效为49.02％)，但差异不显著。 与发病初期、盛期、末期的各对照药剂比较，20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病发病前的处理防效和发病后的处理防效一直上升，说明其药效稳定，持效期较长。对黑胫病发病前的处理的防效明显高于发病后的处理，进一步证明20<'＃>-5菌发酵液对烟草黑胫病主要起预防作用。 4.定殖试验 通过逐步提高链霉素(Streptomycin，Stre)浓度的方法，成功对20<'＃>-5菌进行了抗链霉素标记，获得了抗200μg·ml<'-1> Stre的自发突变株，记为20<'＃>-5<'*>。20<'＃>-5<'*>菌在牛肉膏蛋白胨培养基中连续传代10次，仍具有稳定的抗药性，且与原始菌株具有相似的平板拮抗能力和盆栽控病效果，可以作为20<'＃>-5菌的标记株进行定殖研究。 在20<'＃>-5<'*>菌的定殖试验中，所用烟草品种和土壤均与盆栽控病试验一致。结果表明，菌悬液灌根处理1d后，就能在烟草根、茎、叶内部检测到20<'＃>-5<'*>菌。根内部标记菌的数量在灌根后7d里逐步上升，之后有所下降；茎和叶内部标记菌的数量在灌根后12d里一直处于上升阶段，之后也有所下降。这说明20<'＃>-5菌具有内生性。灌根后17d，仍能在烟草根、茎、叶表面检测到标记菌株，说明20<'＃>-5菌能够长时间定殖于烟草各组织表面。 从定殖数量消长动态看，20<'＃>-5<'*>菌在烟草根、茎、叶内部均有一个

目录

文摘

英文文摘

第1章文献综述

1.1假单胞菌与植物病害的生物防治

1.1.1假单胞菌产生的抗生素

1.1.2假单胞菌生防作用机理

1.1.3假单胞菌在植物病害防治中的应用

1.2烟草黑胫病研究进展

1.2.1烟草黑胫病的分布与危害

1.2.2烟草黑胫病的防治

1.3生防菌定殖研究概况

1.3.1生防菌的检测方法

1.3.2影响生防菌定殖的因素

第2章引言

2.1研究目的与意义

2.2主要研究内容

2.3技术路线

第3章20#-5菌对烟草黑胫病菌的拮抗作用

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

3.2.1 20#-5菌对烟草黑胫病菌的直接拮抗作用

3.2.2 20#-5菌发酵液对烟草黑胫病菌生长的影响

3.3讨论

第4章20#-5菌发酵液防治烟草黑胫病的盆栽控病试验

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果与分析

4.3讨论

第5章20#-5菌发酵液防治烟草黑胫病的田间试验

5.1材料和方法

5.1.1材料

5.1.2方法

5.2结果与分析

5.2.1发病初期各药剂对烟草黑胫病防治效果比较

5.2.2发病盛期各药剂对烟草黑胫病防治效果比较

5.2.3发病末期各药剂对烟草黑胫病防治效果比较

5.3讨论

第6章20#-5菌定殖试验

6.1材料与方法

6.1.1材料

6.1.2方法

6.2结果与分析

6.2.1抗200μg·ml-1 Stre菌株的获得

6.2.2标记菌株抗药稳定性的检测

6.2.3标记株与原始株性状的比较

6.2.4 20#-5菌的定殖试验

6.3讨论

第7章小结与展望

7.1小结

7.2展望

参考文献

发表的论文及参加的课题

致谢