家蚕蛾吐出液蛋白质分析及相关分泌器官功能研究

摘要

家蚕蛾吐出液是蚕蛾在羽化过程中分泌的一种液体，其中含有溶茧酶，作用是软化和溶解茧层以便使蚕蛾从茧里出来。为了研究家蚕吐出液分泌器官的功能，将生理学实验和蛋白质组学实验相结合，通过摘除下腭、涎腺，对摘除后的吐出液进行酶活性的研究，通过MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸附离子化质谱技术)和LC-MS/MS(液相色谱-质谱联用)方法对吐出液的蛋白质进行了研究，对下腭、涎腺及中肠在吐出液分泌过程中的作用做了进一步的探讨，为溶茧酶的分泌机制和吐出液蛋白质的研究打下了基础。
　　 1.家蚕蛹期下腭和涎腺的摘除对蚕蛹至蛾发育并没有明显影响，摘除下腭或涎腺后蚕蛹大多能发育成蛾，实验中蛹的死亡原因主要是由于摘除后流血过多或感染所致。
　　 2.通过测定摘除下腭的蛾吐出液、摘除涎腺的蛾吐出液、下腭晶体、嗉囊液的丝胶酶活性、蛋白酶活性、酯酶活性和纤溶酶活性，表明蚕蛾吐出液中的溶茧酶仅仅来自于下腭，中肠虽然也能分泌溶茧酶，但不会参与溶茧过程，而是在分泌到体外的过程中全部失活。造成嗉囊液溶茧酶失活的具体机制还不是很清楚，但实验结果表明它是由于涎腺的抑制作用所致。中肠分泌的溶液具有溶剂的作用，它为下腭晶体提供适宜的pH环境。涎腺的在脱茧过程中具有重要作用，它能有效地调控溶茧酶的活性。中肠分泌的溶液中除了溶茧酶外还含有其他的具有纤溶酶活性的酶类。
　　 3.对SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳)差异点的MALDI-TOF-MS进行鉴定，摘除下腭的创伤对照组所具有的一条差异条带鉴定为溶茧酶，摘除下腭吐出液在SDS-PAGE的同一位置上不具有蛋白条带，因此认为，摘除下腭的吐出液不具有溶茧酶，也就是说中肠的溶茧酶在分泌到体外时已全部失活。
　　 4.通过LC-MS/MS方法在家蚕蛾吐出液中鉴定出29个蛋白，其中酶类蛋白占63％，另外还包含有一些转运蛋白、免疫相关蛋白等。在酶类蛋白中含有几种丝氨酸蛋白酶抑制剂，推测这些蛋白可能来源于涎腺。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.1蚕蛾吐出液

1.2蚕蛾溶茧酶的研究

1.3溶茧酶基因的克隆与表达

1.4溶茧酶的应用前景

1.5蛋白质组学的主要研究方法

第二章绪论

2.1研究背景与意义

2.2研究内容

2.3研究方法与技术路线

第三章摘除下腭、涎腺对家蚕蛹期发育及蚕蛾吐出液酶活性的影响

3.1材料

3.2方法

3.3结果与讨论

第四章摘除下腭蛾吐出液及嗉囊液的SDS-PAGE分析

4.1材料

4.2方法

4.3结果与讨论

第五章SDS-PAGE差异蛋白质的MALDI-TOF-MS分析

5.1材料

5.2方法

5.3结果与讨论

第六章家蚕蛾吐出液蛋白质的LC-MS/MS分析

6.1材料

6.2方法

6.3结果与分析

第七章小结

参考文献

在校期间发表的论文

致谢