补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织PAF含量及超微结构的影响

摘要

目的:探讨补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction，BYHWD)对脊髓损伤(SpinalCord Injury，SCI)大鼠脊髓组织血小板活化因子(Platelet Activating Factor，PAF)含量及超微结构的影响，从微观角度探讨脊髓损伤的病理机制，阐明传统中药复方BYHWD防治SCI的作用靶点，为其在促进神经损伤修复的临床应用提供实验依据。
　　 方法:应用SPF级Wistar大鼠76只，体重(195±10)g，雌雄各半。实验大鼠先按性别分层，然后根据体重采用随机数字表法分组，其中正常组(Group A)16只，造模组60只，造模大鼠采用Allen's打击法制作中度SCI模型。造模完成后先观察伤情，待伤情稳定一周后，参照改良Tarlov评分标准，选择后肢运动功能障碍评分为2～3分的模型大鼠48只，分为模型组(Group B)、BYHWD组(Group C)、金纳多组(Group D)，每组16只模型大鼠。BYHWD组给予BYHWD40g/kg·W，金纳多组给予金纳多45.5mg/kg·W；正常组及模型组给予相同体积的蒸馏水，用药2w结束实验。于造模前(即0d)、造模后3d、1w、2w、3w，对实验大鼠进行称重；同时采用Tarlov评分标准评价各组大鼠后肢运动功能；用药结束后，采用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测SCI大鼠脊髓组织中PAF含量；取SCI大鼠脊髓组织制片行HE染色光镜和透射电子显微镜观察组织学及超微结构变化。
　　 结果:(1)体重分析结果：正常组大鼠体重在0d～3w内平稳增加；造模损伤使大鼠体重明显降低，模型组与正常组时间效应趋势比较差异有显著性统计学意义(P<0.01)，模型用药组与模型组比较差异有显著性统计学意义(P<0.01)，而模型用药组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；用药前即造模后3d～1w，模型用药组体重增长缓慢，与模型组同时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)；给药后，各组大鼠体重大小依次为：正常组>BYHWD组>金纳多组>模型组，BYHWD组与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)，与金纳多组及模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 (2)大鼠后肢运动功能Tarlov评分结果：在0d～3w内，正常组大鼠后肢运动功能Tarlov评分无明显变化；BYHWD组与金纳多组评分随时间变化差异无统计学意义(P>0.05)，与模型组及正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)；各时间点组间比较结果：造模后3d，模型组大鼠评分显著降低，与正常组比较差异有显著性统计学意义(P<0.01)，各造模组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；用药前即造模后3d～1w，模型组大鼠后肢运动功能恢复缓慢；灌胃给药后即造模后1w～3w，模型用药组大鼠后肢运动功能明显恢复，与模型组同时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)，而BYHWD组与金纳多组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
　　 (3)脊髓组织PAF含量分析结果：正常组大鼠脊髓组织PAF含量维持在较低水平，模型组脊髓组织PAF含量明显高于正常组(P<0.01)，BYHWD及金纳多均可明显降低SCI大鼠脊髓组织PAF含量，与模型组比较差异有显著性统计学意义(P<0.01)，而BYHWD组SCI大鼠脊髓组织PAF含量明显低于金纳多组，两者比较差异有显著性统计学意义(P<0.01)。
　　 (4)脊髓组织HE染色观察结果：正常组细胞结构排列整齐，神经元细胞分布均匀、形态正常，无神经元细胞坏死现象；模型组损伤区出现大片出血，胞浆渗出、细胞肿胀、尼氏体消失、细胞核呈游散状态，形成巨大空腔，呈囊腔样病变；BYHWD组损伤区部分神经元细胞形态已基本趋于正常，数目也增多，组织分布均匀；偶见新生毛细血管，少量细胞核固缩；但金纳多组损伤区神经组织分布依旧疏松，仍可见巨大的空腔，出现数量较多的微囊，神经元细胞核固缩现象有所改善；脊髓组织修复呈以下趋势：BYHWD组>金纳多组>模型组。
　　 (5)脊髓组织透射电镜观察结果：正常组脊髓组织超微结构完整，排列整齐，神经元结构清楚，胞质内线粒体结构正常，髓鞘轮廓光整，多处于静止相；模型组表现线粒体体积增大，髓鞘肿胀严重，鞘内腔扩大，多数线粒体髓鞘断裂溶解；BYHWD组神经元细胞线粒体髓鞘膜较完整，部分可见髓鞘板层修复紧密，新生的髓鞘聚集在微血管周围，内膜的微血管可见增生；金纳多组部分线粒体髓鞘断裂溶解、膜破裂和线粒体数量减少，有空泡现象存在，线粒体外形不易辨认，部分细胞结构修复。超微结构病理变化视觉评分显示胞内和灰质内空泡存在现象修复程度呈以下趋势：BYHWD组>金纳多组>模型组。
　　 结论:(1)SCI后，模型大鼠的体重和后肢运动功能均明显降低，BYHWD给药后可显著改善模型大鼠的后肢运动功能，促进大鼠体重恢复和增长；
　　 (2)SCI后，由于损伤脊髓PAF的过度生成及异常释放，损伤脊髓组织PAF含量明显增多，而BYHWD可显著降低SCI大鼠脊髓组织PAF含量，以减轻大量PAF对脊髓组织的继发性损伤；
　　 (3)BYHWD能有效保护损伤脊髓组织的组织结构继发性损伤，营养神经元细胞，促进神经纤维的修复；
　　 (4)BYHWD促进脊髓神经组织结构及功能的恢复与通过降低内源性脊髓组织PAF含量，从而阻断PAF的继发性损害作用有关，是该方治疗中医“痿证”的作用机理之一；
　　 (5)SCI大鼠脊髓组织超微结构改善程度明显优于脊髓组织中的PAF含量降低幅度，这与BYHWD中重用黄芪以补气为主，促进损伤神经修复，而其他六味药则以活血、抗炎等作用为辅的组方思路有关，为该方的组方特色提供了新的实验药理学依据。