四川攀枝花赛葵上双生病毒的检测与鉴定

摘要

粉虱传双生病毒(Whitefly-transmittedgeminivirus,WTG)是世界上多种经济作物上的重要病原之一,造成的危害和损失严重。近年来在我国海南、广东、福建、云南等地多有WTG侵染的报道,在四川的番茄上也已造成严重的危害。本实验室从四川攀枝花发现了表现黄脉症状的杂草赛葵样品,由于杂草是双生病毒重要的中间寄主和初始侵染源,为明确杂草赛葵样品中双生病毒的种类,我们对这些赛葵样品进行了针对双生病毒的检测,并对病毒的基因组结构及变异进化进行了分析。
　　 利用已报道的双生病毒通用引物PA/PB,对所有155份赛葵样品进行PCR检测,共有108份样品扩增到了长约500bp的特异片段,阳性率为69.68%,其中仁和区的样品64份,红格镇44份,这表明赛葵样品中存在双生病毒的侵染。扩增到了病毒DNA-A的全基因组,序列比对分析表明,赛葵样品中扩增到的双生病毒包括中国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlChinavirus,TYLCCNV)及云南赛葵黄脉病毒(MalvastrumyellowveinYunnanvirus,MYVYNV)两种病毒。通过序列比对及构建系统进化树发现,赛葵样品(SC44、SC95、SC170、SC211、SC314、SC344、SC327及SC329)扩增到的MYVYNV与GenBank中登录的MYVYNV(AJ971501.2)具有最大的序列相似性(98.4%～99.9%),亲缘关系最近;样品SC44扩增到的TYYLCCNV-SC44与TYLCCNV-TbY10(AJ319675)序列相似性高达99.1%,而从样品SC327中扩增到的TYLCCNV-SC327与TYLCCNV-TbSC101(JN082233.1)的序列同源性高达99.5%。利用双生病毒卫星DNAβ分子的通用引物β01/β02,从89份样品中扩增到了长约1300bp的条带,阳性率为57.42%,其中仁和区的样品有54份,红格镇35份。经鉴定样品中存在两类卫星DNAβ分子,分别是伴随MYVYNV的卫星MYVYNB和伴随MYVV的卫星MYVB。利用双生病毒卫星DNAα分子及DNA-B组份的特异性引物在所有样品中均未检测到目的条带。
　　 对赛葵样品中病毒及卫星DNAβ分子复合侵染的检测表明,用双生病毒特异性引物检测这些样品,有104份样品检测到了MYVYNV,有70份检测到了TYLCCNV,同时检测到这两种病毒的样品共有70份,所占比例为45.16%,表明田间赛葵样品中双生病毒复合侵染现象普遍。有19份样品同时检测到两种病毒MYVYNV和TYLCCNV及伴随两种卫星MYVYNB和MYVB,占比例为12.26%,仅有1份样品为两种卫星MYVYNB和MYVB分子共同伴随MYVYNV但未伴随TYLCCNV;未发现MYVYNB和MYVB这两种卫星分子仅仅伴随TYLCCNV的现象。