酰化表没食子儿茶酚没食子酸酯抗癌和降糖活性研究

摘要

绿茶受到研究者的密切关注主要是由于其药理活性成分儿茶素，主要包括四种多酚类物质:表儿茶酚(EC)，表没食子儿茶酚(EGC)，表儿茶酚没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)，其中EGCG含量最多。研究表明，EGCG有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗癌和降糖等多种活性，但是EGCG具有不稳定，脂溶性差，生物利用度低等缺点，在临床应用上受到一定的限制。本文制备了全乙酰化EGCG、全丙酰化EGCG和全丁酰化EGCG，以HepG2细胞、Hela细胞、α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶为模型，探讨酰化基团大小对抗癌活性和降糖活性的影响。主要内容有:
　　 (1)全酰化EGCG的制备酸酐为酰化剂与EGCG反应，吡啶为催化剂，在40℃反应数小时，TLC和HPLC监测反应终点。反应液经水洗、0.5mol/L碳酸钠溶液、饱和氯化钠溶液反复洗涤，收集有机层，无水硫酸钠干燥后过滤，真空浓缩处理，干燥即得产物。经HPLC检测其纯度分别为98.42％、98.86％和95.14％。
　　 (2)理化性质研究对酰化产物进行溶解性、紫外吸收和油水分配系数等测定。结果表明:酰化之后几乎不溶于水，在有机溶剂中溶解度大幅度提高;EGCG在210nm和280nm处有较大吸收，而酰化产物最大吸收波长为250nm，最大吸收波长发生了蓝移;油水分配系数由小到大的顺序为lgPEGCG＜lgPAcEGCG＜lgPPrEGCG＜lgPBuEGCG。
　　 (3)抗癌活性研究以HepG2细胞和Hela细胞为模型，研究酰化EGCG对其抑制作用。在1～1OOμg/mL浓度范围内，HepG2细胞中，EGCG和AcEGCG抑制率较低，PrEGCG和BuEGCG抗癌活性相当，IC50分别为54.631、23.081、17.121、15.351μg/mL;在Hela细胞中，抗癌活性大小EGCG＜AcEGCG＜PrEGCG＜BuEGCG，IC50分别为68.2、51.76、31.11、20.27μg/mL。细胞吸收药物实验表明，随酰化基团的增大，试药进入细胞的能力越强，抗癌活性越高。AcEGCG与Dox联用可以明显提高Dox对癌细胞的抑制作用，而且高浓度PrEGCG与中低浓度Dox联用，也有一定的协同效应，但是BuEGCG几乎没有相同效果。
　　 (4)降糖活性研究以α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶为模型，研究酰化EGCG对其抑制作用。EGCG和酰化EGCG对α-葡萄糖苷酶的抑制分别呈明显的剂量依赖关系，抑制效果都强于阳性对照阿卡波糖。与EGCG相比，全酰化EGCG的抑制率都较高，IC50分别为291.3μg/mL、58.73.μg/mL、65.77μg/mL、61.39μg/mL。α-淀粉酶中出现相同结论，IC50分别为125.0μg/mL、101.4μg/mL、81.47μg/mL、61.59μg/mL。

目录

声明

摘要

第1章 文献综述

1．1 EGCG酰化修饰研究进展

1．1．1 EGCG酰化修饰原理

1．1．2 酰化修饰方法

1．2 EGCG抗癌和降糖活性研究进展

1．2．1 抗癌活性

1．2．2 降糖活性

第2章 引言

2．1 研究目的和意义

2．2 研究内容

第3章 全酰化EGCG的合成

3．1 材料

3．1．1 材料和试剂

3．1．2 仪器

3．1．3 试剂配制

3．2 方法与结果

3．2．1 全酰化EGCG的制备与纯化

3．2．2 全酰化EGCG HPLC检测

3．2．3 全酰化EGCG合成条件优化

3．2．4 全酰化EGCG合成产率和纯度

3．3 讨论与小结

第4章 全酰化EGCG的理化性质研究

4．1 材料

4．1．1 材料与试剂

4．1．2 仪器

4．2 方法与结果

4．2．1 全酰化产物溶解性

4．2．2 全酰化产物紫外图谱扫描

4．2．3 全酰化EGCG油水分配系数测定

4．3 讨论与小结

第5章 全酰化EGCG的抗癌活性研究

5．1 材料

5．1．1 材料和试剂

5．1．2 仪器

5．1．3 溶液配制

5．2 方法与结果

5．2．1 细胞培养

5．2．2 全酰化EGCG细胞毒性试验(MTT)

5．2．3 全酰化EGCG细胞吸收实验

5．2．4 全酰化EGCG联合多柔比星(Dox)抗癌活性

5．3 讨论与小结

第6章 全酰化EGCG抑制α-糖苷酶和α-淀粉酶研究

6．1 材料

6．1．1 材料和试剂

6．1．2 仪器

6．1．3 试剂配制

6．2 方法与结果

6．2．1 全酰化EGCG体外抑制α-葡萄糖苷酶活性

6．2．2 全酰化EGCG体外抑制α-淀粉酶活性

6．3 讨论与小结

展望

参考文献

致谢

在校期间发表的论文